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菌种保存方法介绍 卫生部北京医院--艾效曼 菌种保存的目的： 1. 临床诊断和治疗需要，以备复查及补充药敏试验 2. 实验室质量控制所必需。 3. 卫生学监测用菌种，特别是院内感染（包括消毒 剂）监测、 4. 教学 （包括实习）、院内（外）培训（包括进修） 5. 科研及对外交流等工作，承担和完成各级科研课 题及新药临床验证。 临床菌库组成 参考菌株： ATCC ：美国典型菌株保存中心。 NCTC：英国国家典型菌株保存中心。 CMCC(B)：中国医学细菌保藏管理中心。 质控菌株：WHO及各级临检中心发放的室间质控菌株。 临床分离菌： 实验中用标准方法鉴定，鉴定值95 ％典型菌株，并 经多次传代，特征衡定的菌株。不同耐药机制的菌株。 菌库建立的硬件条件 • 保存条件： 低温保存、 厌氧保存、 冻干保存、 • 可以保存的菌株 菌库保存的软件条件 • 完善安全的管理制度 双人双锁制度、各类登记制度(入库登记、 出库登记、菌种去向登记、销毁记录) • 菌库管理人员的责任心 • 生物安全相关文件 根据菌种保存介质分类 • 脱脂牛奶保存 • 甘油保存 • 肉汤保存 • 血浆保存 • 纸片保存 • 琼脂平板保存 • 高层斜面保存 • 半固体保存 根据不同菌种的营养要求分类 • 非苛养菌：高层琼脂、冷冻干燥、肉汤、血浆、 10%甘油、滤纸片、半固体琼脂培养基、琼脂平板 注意：常温、低温、超低温均可 • 假单胞菌：冷冻干燥、肉汤、血浆、10%甘油、滤 纸片、半固体琼脂培养基、琼脂平板 注意：常温、超低温均可 • 苛养菌株：平板传代保存、推荐冷冻干燥 • 厌氧菌：平板传代保存、室温厌氧湿盒法、-30℃~- 80℃冷冻保存 注意：常温、超低温均可 根据保存菌种所期望的时限分类 • 长期保存的菌种，采用脱脂牛奶冷冻干燥方法进 行保存，其复溶效果及细菌存活率较用肉汤、血 浆等附形物要好，10%甘油； • 中短期保存的菌种，根据菌种的不同采用脱脂牛 奶、血浆、全血、滤纸片、半固体琼脂培养基及 琼脂平板传代等方法进行保存； • 现用菌株，琼脂斜面、半固体、平板保存 短期保存的菌种： • 半固体过夜培养覆盖石蜡油 （1cm厚）后， 于4℃保存 （假单胞菌于室温保存）， • 微生物自动鉴定仪可将鉴定卡片放低温冰 箱保存。 • 苛养性细菌和厌氧菌，可采用平皿传代的 方法保存。 中期保存的菌种 • 脱脂牛奶-冷冻、 • 血浆-冷冻、 • 全血-冷冻、 • 滤纸片-冷冻、 • 半固体琼脂培养基-冷藏或室温、 • 高层斜面保存-冷藏或室温、 • 琼脂平板传代-冷藏或室温； 长期保存的菌种 • 采用脱脂牛奶冷冻干燥方法进行保存，其 复溶效果及细菌存活率较用肉汤、血浆等 附形物要好， • 10%甘油或甘油肉汤 • 注意：均为低温冷冻 3.厌氧菌的保存 • 冷冻真空干燥是最好的保存方法，但不 易做到。 • 平皿传代是较简单且实用的方法。将需 要保存的菌株接种于布氏血琼脂平板上， 放入厌氧罐（或袋）中于孵箱中培养48小 时后，放室温阴凉处可保存两个月。