一种高效的真菌总蛋白质提取方法.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（９）：５３５８ 一种高效的真菌总蛋白质提取方法 胡彬彬　林连兵　魏云林　季秀玲　张　琦 （昆明理工大学生命科学与技术学院　昆明　６５０５００） 摘要　蛋白的提取是蛋白质组学研究的首要步骤，其质量的好坏直接影响蛋白质表达分析研究 的开展及其结果的准确性。为了从深黄被孢霉Ｍ６２２中提取细胞总蛋白质并进一步进行蛋白组 学等一些相关研究，采用五种已报道的蛋白质提取方法分别提取深黄被孢霉Ｍ６２２的总蛋白质， 以蛋白质浓度和ＳＤＳＰＡＧＥ结果分析相结合的方法比较提取方法。结果显示，其中一种方法提取 的蛋白质浓度相对较高而且蛋白质条带丰度最高，进一步对该方法进行了改良，所获得蛋白质的 浓度可达约２．９９ｍｇ／ｍｌ。改进后的方法操作步骤简单，蛋白质条带丰度更高。采用改进后的方法 提取其他五种真菌的总蛋白质，结果显示其对其他真菌也有很好的提取效果，说明可作为一种真 菌总蛋白质的高效提取方法。 关键词　真菌总蛋白　深黄被孢霉Ｍ６２２　ＳＤＳＰＡＧＥ 中图分类号　Ｑ９３６ 　　由于基因组学本身的局限性，科学家们又进一步 破碎真菌细胞壁，同时又可以减少破壁过程中蛋白质 提出了后基因组计划，蛋白质组学研究便是其中一个 损失，而且尽可能的使蛋白质溶解在提取液中成为提 ［１］ 很重要的内容 。双向电泳作为蛋白质组学的核心研 取真菌高质量蛋白质组的关键。而且，目前已报道的 究技术，在蛋白质组学研究中起着举足轻重的作用。 真菌总蛋白质的提取方法一般仅适用于一种或者少数 制约双向电泳成败的因数有很多，样品制备作为双向 几种真菌，还没有一种广泛的适用于大部分真菌的提 电泳的第一步，蛋白质提取质量是决定双向电泳成败 取方法。 的关键，因为蛋白质组的质量直接决定了双向电泳的 　　深黄被孢霉是目前国内用于研究发酵生产 亚油 γ ［２］ 分辨率、重复性和蛋白质组图谱分离效果 。只有提 酸的主要菌株，其可合成多种多不饱和脂肪酸，而且合 取到物种高质量的细胞总蛋白，在蛋白质组研究中才 ［４６］ 成途径清楚 。在前期的初步研究中，我们发现深黄 能避免失去一些有价值、有意义的低丰度蛋白质，而这 被孢霉 Ｍ６２２可以在５～３５℃生长，具有适应低温性。 些低丰度蛋白质往往是机制调节中的关键蛋白质，因 我们拟从蛋白质组学入手，利用双向电泳技术分离与 此一种高效的总蛋白质提取方法对于进行蛋白质组的 低温信号传导、能量代谢、细胞分裂、物质代谢等与低 研究具有十分重要的作用。 温适应性相关的关键蛋白质，揭示深黄被孢霉的低温 　　真菌与人类的生活息息相关，在工业、农业、医药 适应机制与多不饱和脂肪酸合成的关系。因此，建立 以及基础生物学研究中具有重要的作用，已成为学术 一种深黄被孢霉总蛋白质的高效提取方法，获得其完 ［３］ 界研究的热点 。由于真菌细胞壁是由胞壁蛋白质与 整的蛋白质组对低温适应机制的研究具有重要的 葡聚糖、甘露聚糖以及几丁质错综交织形成的，其结构 意义。 坚韧、不易破碎，提取总蛋白质