高效可溶性重组蛋白表达载体的构建.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2010, January 25; 26(1): 121−129 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2010 CJB, All rights reserved. 生物技术与方法 高效可溶性重组蛋白表达载体的构建 * * 姜媛媛 ，刘铭瑶 ，任桂萍，朱慧萌，李德山 东北农业大学生命科学学院 生物制药教研室，哈尔滨 150030 摘 要: 本研究构建了两种高效表达可溶性重组蛋白的原核表达载体。一种载体由HisSUMO 序列与pET30a(+)载体连 接而成 (命名为HisSUMO Express) ，表达的融合蛋白用Ni-NTA 纯化，用SUMO 蛋白酶I 切割后可获得不留任何残基 的重组蛋白。SUMO-蛋白酶 I 价格较贵，为减少表达蛋白的成本，第二种载体即在 His-SUMO 和目的序列之间加入羟 胺切割位点 (命名为HisSUMO Economic) 。在HisSUMO Economic 中表达的融合蛋白用Ni-NTA 纯化，羟胺液切割后可 获得仅留一个甘氨酸残基的重组蛋白。以在常规表达载体中难以表达的鼠源成纤维细胞生长因子-21 (mFGF-21) 为例， 经葡萄糖消耗实验检测其活性，验证两种表达载体的效果。结果表明mFGF-21 在两种载体中均获得了高效表达，融合 蛋白占菌体总蛋白的40 ％以上，Ni-NTA 纯化后的融合蛋白分别利用羟胺切割液和SUMO 蛋白酶I 切割，纯化的mFGF-21 成熟蛋白回收量约为 54 mg/L ，回收率约为6 ％。经两种载体表达后的mFGF-21 蛋白均具有生物学活性，可促进脂肪 细胞消耗葡萄糖，为进一步研究提供了基础。 关键词: 鼠源FGF-21 ，高效表达载体，羟胺切割 Construction of expression vectors for efficient expression of soluble recombinant proteins * * Yuanyuan Jiang , Mingyao Liu , Guiping Ren, Huimeng Zhu, and Deshan Li College of Life Science, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China Abstract: The aim of the study is to construct two vectors for efficient expression of soluble recombinant proteins. The first vector was constructed by cloning the HisSUMO fragment into an expression vector pET30a(+) to fuse with the gene of interest (designated as HisSUMO Express). The second vector was constructed in the same way, but with a hydroxylamine cleavage site between HisSUMO and the gene of interest for