高内涵筛选与流式细胞分析技术在心肌成纤维细胞增殖研究 - 生理学报.PDF

生理学报Acta Physiologica Sinica , April 25, 2014, 66(2): 215–222 215 DOI: 10.13294/j.aps.2014.0026 实验技术 高内涵筛选与流式细胞分析技术在心肌成纤维细胞增殖研究 中的应用 * 崔巍，李玉琳 ，吴依娜，张聪聪，刘飒，赵莉敏 首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所，心血管重塑相关疾病教育部重点实验室，北京 100029 摘 要：心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts, CFs)增殖参与了心脏疾病的病理生理过程并发挥重要作用。本文旨在应用高内涵 (high-content screening, HCS) (flow cytometry, FCM) CFs 筛选 和流式细胞术 分析评价 增殖，以期建立精确定量评价细胞增殖和 C57BL/6J ( 24~48 h)CFs (discoidin domain receptor 2, 细胞周期的方法。采用酶消化法分离 新生乳小鼠出生 ，盘状结构域受体 DDR2) CFs 95% CFs 12 h 10% (fetal bovine serum, FBS) 24 h 染色显示分离后培养的 纯度 。 经血清饥饿 后给予 胎牛血清 处理 ，进 (5-bromodeoxyuridine, BrdU) (diamidino-phenylindole, DAPI) BrdU 7- 行溴脱氧尿苷 和二脒基苯基吲哚 原位染色或 和 氨基放线菌 D (7-Aminoactinomycin D, 7-AAD) HCS FCM CFs (1) HCS 素 单细胞悬液染色，分别利用 或 检测 增殖和细胞周期。结果表明： 分 析显示，10% FBS诱导组BrdU 阳性细胞比例与无血清对照组比较有显著性差异[(12.96 ± 0.67)% vs (2.77 ± 0.33)%; P 0.05] ； G0/G1 DNA (2N) S DNA G2 DNA (4N) M DNA 细胞周期分析显示，细胞处于 期 为二倍体 ，进入 期 复制， 期 倍增 ，到 期 平分到两个 子细胞核中(2N) 。(2) FCM分析显示，10% FBS诱导组BrdU 阳性细胞比例比无血清对照组明显增大，差异显著[(11.10 ± 0.42)% vs (2.22 ± 0.31)%; P 0.05] DNA 10% FBS S (3) ； 含量直方图细胞周期分析显示， 诱导组 期平台比对照组明显抬高。 对 HCS FCM BrdU G0/G1 S G2/M