多花蔷薇总RNA提取方法3.PDF

中国生物工程杂志 　Ch ina B iotechno logy, 2005, 25 ( 9) : 89 ～93 技术与方法 多花蔷薇总 RNA 提取方法 1, 3 2 1 赵小兰 　苏晓华 　赵梁军 ( 1 中国农业大学观赏园艺与园林系 　北京 　100094　2 中国林业科学研究院林业研究所 　北京 　100091) ( 3 湖北民族学院生物科学与技术学院　恩施 　445000) 摘要 　根据总 RNA 完整性 、纯度和得率筛选出适合多花蔷薇幼嫩根 、叶总 RNA 的提取方法 。结 果表明 , 以 CTAB /酸酚法提取的扦插苗根系总 RNA 、以 L iC l - 尿素法提取的扦插苗根 、叶总 RNA 以及采用 RN ea sy P lan t M in i Kit试剂盒的改进方法提取的组培苗嫩叶总 RNA 电泳有清晰明亮的 28S、18S条带 ,无降解 ;其 A260 /A280值为 1. 73 ～2. 04 , 表明总 RNA 质量好 。R T - PCR 结果进 一步证实所提取的总 RNA 能够用于分子生物学的各种下游实验 。RNA 得率分别为 :根系和组培 μ ( ) μ ( ) 苗嫩叶 120 - 140 g/ g fw ,扦插苗嫩叶 190 - 230 g / g fw 。CTAB /酸酚法提取的嫩叶总 RNA 、 SD S/酸酚法提取的根 、叶总 RNA 有多糖污染 ,且有明显降解 。Total RNA iso lation system ( Z5111, ) Prom ega 试剂盒不适合提取多花蔷薇各组织总 RNA 。 关键词 　多花蔷薇 ( R osa m u ltif lora) 　RNA 提取 　L iC l - 尿素法 　CTAB /酸酚法 ( ) 　　多花蔷薇 R osa m u ltif lora thunb. 在我国、日本 、美 用的 RNA 提取试剂盒提取其总 RNA , 比较研究各种方 国等国家被广泛用作月季砧木 。研究表明, 其种 内蕴 法的提取效果后 , 提出了适合多花蔷薇根 、叶 RNA 提 含着丰富的抗性资源 [ 1, 2 ] 。针对 日益蔓延且严重影响 取的有效方法 ,并通过 R T - PCR 验证了总 RNA 质量 。 月季生产与应用的月季根癌病 ,本研究小组通过对蔷 1　材料与方法 薇属资源的长期筛选获得了根癌病抗性材料多花蔷薇 ( ) 1. 1　材 　料 无刺 4 号 待发表 。为深入研究该材料的抗病分子机 理 、克隆抗病相关基 因 , 提取纯度高 、完整性好 的总 ( ) 1. 1. 1　植物材料 　 1 组培苗培养 :选取多花蔷薇无 RNA 是顺利进行相关研究的前提条件 。目前蔷薇属植 刺 4 号当年生幼嫩茎段的中上部节位取材 ,每个外植 物总 RNA 提取方法仅有少量报道 , 其中以热硼酸 /蛋 体一个腋芽 。按常规方法进行外植体表面灭菌 , 然后 白酶 K 法提取月季花瓣总 RNA 较为成功 [ 3～5 ] 。但该 置于 M S + 6 - BA 0. 70m g /L + GA 0. 04m g/L + 3%蔗糖