01实验讲义指导.DOC

电子科技大学生命科学与技术学院 本科教学实验指导书 （实验）课程名称： 电子科技大学教务处制表  实验一 无菌培养的准备（4学时） 3 实验二 MS基本培养基的配制与灭菌（4学时） 6 实验三 外植体接种及愈伤组织诱导（8学时） 10 实验四 愈伤组织继代培养（4学时） 12 实验五 愈伤组织诱导植株再生（4学时） 14 实验六 无菌苗的继代培养及生根培养（4学时） 16 实验七 再生植株的移栽（4学时） 18 实验一 无菌培养的准备（4学时） 一、实验目的 1、培养学生良好的卫生观念，确立组织培养的无菌意识； 2、掌握组织培养实验室的规划与布局； 3、掌握组织培养常用的实验仪器设备及其使用方法1、无菌室清洁 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。无菌室应定期用0.1％的新洁尔灭溶液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。 超净台的使用超净台的平均风速保持在0.32-0.48m/s为宜，过大、过小均不利于保持净化度；使用前最好开启超净台内紫外灯照射1030min，然后让超净台预工作1015min，以除去臭氧和使用工作台面空间呈净化状态；使用完毕后，要用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净，以保证超净台无菌。还要定期用0.1％的新洁尔灭超净台。 器皿的清洗 橡胶制品清洗 新的橡胶制品洗涤方法：0.5mol/L NaOH煮沸15min，流水冲洗，0.5mol/L HCl煮沸15min，流水冲洗，自来水煮沸2次，蒸馏水煮沸20min，50℃烤干备用。塑料制品的清洗塑料制品特点：质软、易出现划痕；耐腐蚀能力强、但不耐热。清洗程序：使用器皿后立即用清水清洗，浸于自来水过夜，用纱布或棉签和50℃清洗液刷洗，流水冲洗，晾干，浸于清洁液15分钟，流水冲洗（15－20遍）,蒸馏水浸洗3次，双蒸水泡24h，晾干备用。包装对用品进行消毒前，要进行严密包装，以便于消毒和贮存。常用的包装材料牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、较大培养皿铝箔。 1、1、无菌操作的概念和其重要性？实验二 MS基本培养基的配制与灭菌（4学时） 一、实验目的 1、维生素类、氨基酸、有机附加物、植物生长调节物质、糖类和培养基根据其态相不同分为固体培养基与液体培养基根据培养物的培养过程分为初代培养基与继代培养基根据其作用不同分为诱导培养基、增殖培养基和生根培养基根据其营养水平不同分为基本培养基和完全培养基。基本培养基主要有MS、White、B5、N6、改良MS、Heller、Nitsh、Miller、SH等；完全培养基就是在基本培养基的基础上，根据试验的不同需要，附加一些物质，如植物生长调节物质和其它复杂有机附加物等。表1 几种常用培养基的配方 单位：mg/L 化合物名称 MS (1962) White (1943) N6 (1974) B5 (1968) Heller (1953) Nitsh (1972) Miller (1967) SH (1972) NH4NO3 1650 720 1000 KNO3 1900 80 2830 2527.5 950 1000 2500 (NH4)2SO4 463 134 NaNO3 600 KCl 65 750 65 CaCl2(2 H2O 440 166 150 75 166 200 Ca(NO3)2(4H2O 300 347 MgSO4(7H2O 370 720 185 246.5 250 185 35 400 Na2SO4 200 KH2PO4 170 400 68 300 K2HPO4 300 FeSO4(7 H2O 27.8 27.8 27.85 15 Na2-EDTA 37.3 37.3 37.75 20 Na-Fe-EDTA 28 32 FeCl3(6h2o 1 Fe(SO4) 3 2.5 MnSO4(4 H2O 22.3 7 4.4 10 0.01 25 4.4 ZnSO4(7 H2O 8.6 3 1.5 2 1 10 1.5 Zn (螯合体) 0.03 10 NiCl2(6H2O 1.0 CoCl2(6 H2O 0.025 0.025 0.025 CuSO4(5H2O