泡沫细胞相关基因兔抗人多克隆抗体的制备.pdfVIP

CN 431262/ R 中国动脉硬化杂志2005 年第 13 卷第 3 期 263 ( ) [文章编号] 2005 1303026304 ·实验研究· 泡沫细胞相关基因 4 兔抗人多克隆抗体的制备 1 1 1 1 1 2 冯大明 , 王 　仁 , 孙文清 , 郭 　芳 , 屈顺林 , 杨向东 (南华大学医学院 1. 病理生理学教研室 , 2. 心血管病研究所 , 湖南省衡阳市 421001) [ 关键词] 　病理学与病理生理学 ; 　泡沫细胞相关基因 4 蛋白 ; 　多肽合成 ; 　多克隆抗体 ; 　制备 [摘 　要] 　目的 　探讨制备泡沫细胞相关基因 4 多克隆抗体的方法。方法 　将从人胎肝文库经聚合酶链反应扩 增获得的泡沫细胞相关基因 4 基因全长 cDNA 序列 ,通过生物信息学分析 ,预测泡沫细胞相关基因 4 编码氨基酸序 列的二级结构、抗原决定簇、功能结构域 ,并进行了多序列比对 ,并根据蛋白质的亲疏水性、二级结构、偶联难度及 实验难度等 ,确定泡沫细胞相关基因 4 抗原 13 肽 PKLVKEEVFWRNY,采用固相多肽合成法合成该抗原片段 ,偶联后 经过基础免疫 ,6 次加强免疫 ,经追踪检测 ,于第四次免疫后 10～14 天颈动脉放血 ,分离血清 ,冷冻抽干 , - 20 ℃保 存而制备了泡沫细胞相关基因 4 兔抗人多克隆抗体。结果 　用固相多肽合成法成功制备了泡沫细胞相关基因4 兔 抗人多克隆抗体 ,该抗体经间接酶联免疫吸附测定法检测其效价为 1 ∶16 000 ,Western blot 检测可见 40 kDa 处有目的 带 ,用免疫组织化学方法从 HepG2 细胞中检测到泡沫细胞相关基因 4 蛋白表达 ,证实该抗体具有较好的反应性和 特异性。结论 　固相多肽合成法省时、省力、制备的抗体效价高;泡沫细胞相关基因 4 兔抗人多克隆抗体的制备 , 为进一步研究泡沫细胞相关基因 4 蛋白在动脉粥样硬化中的功能作用奠定了基础。 [ 中图分类号] 　R363 [文献标识码] 　A The Preparation of Foam Cell Related Gene 4 Rabbit AntiHuman Polyclonal Antibody 1 1 1 1 1 2 FENG DaMing , WANG Ren , SUN WenQing , GUO Fang , QU ShunLin , and YANG XiangDong ( ) 1. Department of Pathophysiology , 2. Institute of Cardiovascular Disease , Nanhua University , Hengyang 421001 , China KEY WORDS 　Foam Cell Related Gene 4 Protein ; 　Peptide Synthesis ; 　Polyclonal Antibody ; 　Preparation ABSTRACT 　　Aim 　To explor