利用侵染性cDNA分析甜菜坏死黄脉病毒RNA5与病毒致病性的关系.pdfVIP

摘要 利用RT-PCR对来自新疆、黑龙江、宁夏、甘肃、河』b省甜菜从根病痫田的并BNYVV分离 物中RNA5纽分进行检测．在来自于新疆、1}复和黑龙江的分离物中发现有RNA5的存在，说明 在我国发生的BNYVV分离物中广泛存在RNA5组分。对新疆、’j‘爱和黑龙江分离物中的RNA5 进行克隆和序列分析斤，与已报道的BNYVV日本D5分离物、法国的F72分离物以及我国内蒙 古发现的包头分离物和呼和浩特分离物的RNA5的核营酸序列和推导氨基酸序列进行同源性比 较。结果表明，不同分离物RNA5核苷酸序列的同源性为93．0％～98．7％，变异主要集中在编码 蛋白启始密码子AUG前100个核营酸的区域内。所有RNA5基因组都只包含一个开放阅读框架 各分离物的氦基酸序列同源性为89．7％～98．7％。 构建了RNA5编码蛋自的原核表达载体pETHu26，经IPTG诱导后在大肠杆菌中得到表达， 表达的融合蛋白包含载体编码的45个氨基酸和RNA5编码的26kDa蛋白。用融合蛋白免疫家兔． 制备了RNA5编码蛋白的特异性抗血清，Western blot分析表明该血清可以用于BNYVV接种番 杏叶片后RNA5编码26kDa蛋白的检测。 blot 菜，结果表明RNA5影响病毒侵染后寄主的症状表达和病毒在寄主内的积累，并EL和甜菜丛根病 相关的因素。 变体的侵染性克隆。经体外转录后与BNYVV-I-Iu3的RNAs混合接种番杏，Northern blot检测表 明这些突变体的体外转录物都具有侵染性。崩编码区翻译起始密码(AUG)突变体侵染性克隆 上的作刚。这些突变体对RNA5的功能的影响正在进一步研究中。 关键词：甜菜坏死黄脉病毒，RNA5，侵染性eDNA克隆，致病性 Abstract were BNYVVfrom andHebei screened isolatesNingxia，Xinjiang，Hei／ongjiang，Gansuprovinces by in theRNA5 identifiedtheisolatesfrom RT-PCRand was and component Ningxia．Xinjtang theBNYVV that isolates RNA5 were Heilongjiangamongthem，indicating containing component distributedin ofChina widely sugarbeet areas TheRNA5 wereclonedinto growing components vectorandtransformedln￡coEstrainDH一5 showed pUCm—T d．Sequenceanalysis thattheRNA5 inthe