实验室HBVDNA定量检测的临床意义-北京大学I.ppt

* 我国肝癌患者占全球年肝癌发生病例的55%，其中80%-90%与慢性HBV感染有关。 * * * 我们希望能够通过积极地抗病毒治疗加速病毒的清除，阻断或减缓疾病的进程 * * HBeAg的阴性慢性乙型肝炎患者更易发生肝硬化，肝硬化年发生率达8%~10%，高于HBeAg阳性慢性乙型肝炎(2%~5%)，因此，更应积极开展对HBeAg阴性慢性乙型肝炎的治疗 * * HBeAg的阴性慢性乙型肝炎患者更易发生肝硬化，肝硬化年发生率达8%~10%，高于HBeAg阳性慢性乙型肝炎(2%~5%)，因此，更应积极开展对HBeAg阴性慢性乙型肝炎的治疗 * * HBeAg的阴性慢性乙型肝炎患者更易发生肝硬化，肝硬化年发生率达8%~10%，高于HBeAg阳性慢性乙型肝炎(2%~5%)，因此，更应积极开展对HBeAg阴性慢性乙型肝炎的治疗 * * * * Domestic A Ampllcor Monltor Cobas TaqMan RealArt HBV LC PCR (ArtusBiotech) Abbot Real-time HBV (Abbott) Versant HBV DNA 1.0 (kPCR,Siemens) 10 102 103 104 105 106 107 108 109 (IU/mL) HBV DNA定量检测试剂及其检测灵敏度和线性范围 Domestic B 以上数据来源：各企业试剂说明书 国产乙肝病毒DNA定量试剂在检测方法上与进口试剂存在明显差别 原因分析 一步法煮沸释放HBV DNA + 定量扩增 自动化提取制备HBV DNA + 扩增检测 VS 1ul 国产试剂的实际用于检测的血清量仅为1 ul 200ul 国内现有核酸检测技术流程 PCR体系配置 核酸提取 荧光PCR仪器操作 PCR体系配置，核酸提取，荧光PCR检测。 一站式全自动检测！ 国外的全自动核酸检测仪器 国产乙肝病毒DNA定量试剂质量的提高需向系统（试剂+体系）转换 对策1：技术进步，全自动的核酸提取设 备+基于开放设备的定量试剂 √ 对策2：通过行政手段淘汰劣质试剂； √ 对策3：由维价格论→综合考虑质量与价格√ 我们已经完成配合自动化仪器的磁珠核酸提取试剂，达到国外先进水平。 圣湘公司磁珠法提取效果 国外著名C公司提取效果 圣湘公司自主研发的核酸提取试剂（磁珠法），实现了DNA/RNA共提取。效果等效于国外著名同类试剂。 HBV灵敏度可达10IU/ml，HCV灵敏度达20IU/ml。 10IU/ml 磁珠核酸提取试剂可在各种不同仪器上进行下游检测 * 定量检测HBV感染者血浆 (清) HBV DNA是了解肝内HBV复制水平的可靠指标，也是HBV感染诊断、疗效监控和指导用药的重要指标。 近年，国产试剂的质量得到很大改进，但多数试剂的灵敏度、准确性及重复性等与进口优质试剂相比，仍存在较大差距。尤其对低病毒载量或存在干扰物质的临床标本进行检测时，差距更为明显。 目前我国市场上主流的国产HBV DNA定量试剂盒多是基于即将废除的煮沸法核酸提取方法，检测下限一般为500~1000 IU/ml，不能满足临床诊断的需求。 在国家“十二.五”传染病防治重大专项“乙型病毒性肝炎临床诊断及监测技术的研究”的支持下，基于磁珠法核酸提取的国产HBV DNA定量试剂盒已成为主流研发方向。 * 对国产湖南圣湘乙型肝炎病毒核酸定量检测（PCR-荧光探针法）试剂盒的可溯源性、准确度、精密度和临床应用进行质量考评。 * 用基于磁珠法自动化核酸提取平台的该国产HBV DNA定量试剂盒和罗氏HBV DNA定量试剂盒对WHO的 HBV DNA系列稀释标准品 (50、200、2000、20 000 IU/ml) 进行溯源性分析，确定试剂盒检测的可靠性。 用这2种试剂盒对HBV B和C基因型标准血浆 (分别稀释为25、50、200、2 000、20 000、200 000 IU/ml) 分别在三个不同检测中心共进行216次平行检测，比较其准确度和精密度。 用2种方法平行检测5份HBV DNA阴性血浆样本和37份不同病毒载量的HBV DNA阳性临床血浆标本，并评价其相关性和符合率。 * * 罗氏 COBAS 罗氏 COBAS Version 2.0 雅培 Realtime HBV DNA 湖南圣湘 新型HBV DNA kit 样本用量 850μl 500μl 200μl 或 500μl 200μl 核酸提取方法 自动化仪器，磁珠法 自动化仪器，磁珠法 自动化仪器，磁珠法 自动化仪器，磁珠法 检测下限(LOD) 12 IU/mL (EDTA 血浆) 9 IU/mL (EDT