先天性马蹄内翻足与HoxD基因传递连锁不平衡分析.pdfVIP

中文摘要 目 的 、 ， clubfoot，CCF)是一种常见的 l先天性马蹄内翻足(congenital 严重影响足功能的先天畸形。大部分患儿需要手术治疗，其发病 率约为1％o，目前其病因尚不清楚。遗传流行病学研究表明，先天 性马蹄内翻足的遗传方式属于多基因遗传，其发生是遗传因素与 环境因素共同作用的结果。我国对CCF的病因研究仅限于免疫 组织化学、诱发电位及动物模型等方面，从基因水平研究其发病机 理尚未见报道。近几年，国外有关胚胎发育的基因调控研究取得 了初步进展，发现转录因子Hox基因(homeobox genes)是相关基 因。目前在果蝇和鼠的基因敲除实验中发现Hox基因调节并参 与胚胎后肢骨骼肌肉发育，也有Hox基因与人类肢体发育异常相 关的报道，但先天性马蹄内翻足与Hox基因的关系报道较少方为 的候选基因，选择HoxD基因内多态微卫星标记Hox4Ep，对65个 核心家系进行等位基因检测分析，对32个杂合子父母核心家系进 test，TDT)， 行了传递连锁不平衡检验(transmissiondisequilibrium 以探讨Hox基因D簇与先天性马蹄内翻足的关系。 法 L标本来源 收集65例CCF患者，均有典型的临床表现，经x光片及手术 确诊，并排除其他畸形。取患儿及父母外周静脉血3ml，EDTA抗 凝，常规酚／氯仿法提取基因组DNA。 2．微卫星DNA 选取HoxD簇基因内的一个二核苷酸重复的微卫星DNA标 ·】· 海博亚生物技术有限公司合成。 3．基因型分析 3．1 PCR技术扩增微卫星DNA PCR扩增按常规方法，在PT一200型扩增仪上迸行，反应体 40秒，30个循环。 3．2电泳 取扩增产物10一，经6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离等位 Na2C0，和0．5％甲醛溶液显色，双盲法等位基因型判读。 4．统计学分析 建立TDT表格，采用SPSSl0．0计算机软件，进行传递不平衡 检验及相关分析。 结 果 1．收集65例核心家系中，有23例父母资料不全，难以进行 基因分型者，作者将其排除。通过凝胶电泳做基因分型分析的核 心家系共42例。 2．Hox4Ep位点稳定分离出12个等位基因，其片段分布在 1lO一130bp之间。 3．由于TDT分析要求运用杂合子父母未传递给子代的等位 基因作对照，故排除纯合子父母家系10例，最后32个家系可用于 TDT分析。 4．根据电泳带型建立TDT表格。 5．微卫星DNA Hox4Ep等位基因12，杂合子型父母向子代传 递等位基因12的数目为15，未传递等位基因数目为6，差异显著 (Xz=4．614，Po．05)。，，k J ．2． 结 论 可能是先天性马蹄内翻足的易感基因。 2．Hox4Ep位点可以稳定分离出12个等位基因，其片段分布 在110一130bp之间。 关键词先天性马蹄内翻足；传递连锁不平衡检验；HoxD基 因；聚合酶链式反应 ·3· Test ofTransmissionfor between Study Linkage