人h5n1 亚型禽流感病毒安徽株ns1 基因的克隆及在原核 - 病毒病所.pdfVIP

47 卷 　3 期 ( ) 微 生 物 学 报 47 3 : 418～422 2007 年 6 月 4 日 Acta Microbiologica Sinica 4 June 2007 人 H5 N1 亚型禽流感病毒安徽株 NS1 基因的克隆 及在原核系统的表达 1 1 2 1 1 程从升 , 蓝 　雨 ,柳 　燕 ,张智清 ,舒跃龙 ( 1 中国疾病预防控制中心病毒病研究所 传染病预防控制国家重点实验室 　北京 　100052) (2 安徽省疾病预防控制中心　合肥 　231000) 摘 　要 :利用 RTPCR 方法 ,从人 H5N1 亚型禽流感病毒安徽株扩增到了NS1 基因 ,对其进行了克隆、序列测定和分 析 ,并在原核系统高效表达和纯化了NS1 蛋 白。进化分析表明 ,AAnhui012005 毒株与近些年国内分离的水禽 H5N1 病毒进化关系更为接近 。NS1 与福建 、湖南分离的禽流感病毒同源性最高 ,分别达到 991 %和 982 % 。序列 分析表明 ,与病毒的致病性相关的92 位氨基酸为Asp ,与病毒的细胞因子抗性相关的80～84 位氨基酸发生缺失 ,与 断裂多聚腺苷酸化特异性因子结合的基序改变为 GFEWN ,和病毒致死性相关的 PL 基序为 ESEV 。随后在大肠杆 菌高效表达并纯化了NS1 蛋白。NS1 基因及其编码产物的特性分析以及在原核系统的表达 ,为进一步研究 NS1 的 致病机制和抗病毒药物研制奠定了基础 。 关键词 : 禽流感病毒 ;H5N1 ; NS1 中图分类号 :Q786 ;Q93 　　文献标识码 :A 　　文章编号 (2007) 　　A 型流感病毒基因组包含 8 个片段 。NS 是其 又在许多国家和地区发生人感染病例的报道 。2005 中最小的一个片段 ,在病毒复制时被翻译为一个共 年 10 月 ,我国安徽省发生首例确证的人感染 H5N 1 ( ) [5 ] 线性mRNA ,最终翻译为NS1 和NS2 或NEP 两个蛋 亚型禽流感 。H5N 1 型禽流感病毒的一个重要特 [ 1] 白 。其中 ,NS1 蛋 白通过结合多聚腺苷酸化 的 征就是很快地在呼吸道系统产生广泛的病变 。这种 RNA 和小核 RNA ( small nuclear RNAs , snRNA) 、阻止 临床特征暗示 ,宿主细胞感染病毒后 ,病毒很快就增 前 mRNA 的剪切 、抑制宿主细胞 mRNA 的多聚腺苷 殖到高滴度 ,并在细胞间传播 。已知 NS1 是 I 型干 酸化 ,而在病毒的复制和毒力中发挥重要作用[2 ] 。 扰素等参与抗病毒作用细胞因子的拮抗物 ,NS1 是 其 RNA 结合活性是基于两个功能区的相互作用 :N 否参与了这例病毒感染的进程 ? 为此 ,本研究克隆 末端的 19～38 位氨基酸为 RNA 结合域 , 负责结合