含硒抗病毒多肽的半胱氨酸缺陷型表达及鉴定.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，３４（４）：１６２０ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 含硒抗病毒多肽的半胱氨酸缺陷型表达及鉴定 １，２ １ ２ ２ ２ 王　程 　隋春红 　闫岗林 　吕绍武 　牟　颖 （１吉林医药学院　吉林　１３２０１３　２吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室　长春　１３００１２） 摘要　目的：在大肠杆菌中进行含硒抗病毒多肽的可溶性半胱氨酸缺陷型融合蛋白的表达，并对 其纯化蛋白进行生物学活性的初步鉴定。方法：将含硒抗病毒多肽ＳｅＧＢＶＡ１０基因克隆到ＧＳＴ 融合表达载体ｐＧＥＸ２Ｔ中，转化至半胱氨酸缺陷型大肠杆菌ＢＬ２１ｃｙｓＥ５１后进行半胱氨酸缺陷型 表达，通过谷胱甘肽Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和柱纯化目的蛋白质，并对其含硒量、抗病毒活力等性质进行 初步鉴定。结果：利用半胱氨酸缺陷型表达法成功地可溶性表达了ｓｊＧＳＴＳｅＧＢＶＡ１０和 ｓｊＧＳＴ ＧＢＶＡ１０融合蛋白，并经凝血酶切后获得了纯化的ＳｅＧＢＶＡ１０和 ＧＢＶＡ１０抗病毒多肽。测定Ｓｅ ＧＢＶＡ１０的含硒量为０．９７４ｍｏｌ／ｍｏｌｐｅｐｔｉｄｅ，ＧＰＸ活力为４７．５２Ｕ／ｍｏｌ，其ＥＣ 为２１．７３ｍｏｌ／Ｌ， μ ５０ μ ＣＣ 为８４９．４１ｍｏｌ／Ｌ。结论：ＳｅＧＢＶＡ１０具有与ＧＢＶＡ１０相同的抗病毒活性，并具有一定的抗氧 ５０ μ 化活力。 关键词　硒　抗病毒多肽　谷胱甘肽过氧化物酶 中图分类号　Ｏ６２７．６ 　　元素硒（ｓｅｌｅｎｉｕｍ，Ｓｅ）是人体的必需微量元素，它 为Ｓｅｃ。本文通过可溶性半胱氨酸缺陷型融合蛋白的 在机体内主要以硒蛋白的形式发挥其主要功能，这些 表达方法，在大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，Ｅ．ｃｏｌｉ）中制备 硒蛋白大多数都是氧化还原酶类，参与抗氧化应激相 了含硒抗病毒多肽ＳｅＧＢＶＡ１０并对其进行初步的理化 ［１２］ 性质鉴定。 关的生命活动 。硒蛋白中的硒多数是以硒代半胱 ［３］ 氨酸（ｓｅｌｅｎｏｃｙｓｔｅｉｎｅ，Ｓｅｃ）的形式存在 。硒蛋白除了 １　材料与方法 ［４］ 具有抗氧化活性以外，还具有一定的抗病毒作用 。 若在抗病毒多肽中加入硒元素，制备出含硒抗病毒多 １．１　质粒、菌株和细胞系 　　ｐＧＥＸ２Ｔ质粒购自Ｓｉｇｍａ公司；Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ 菌株 肽，可能会增加原多肽的抗病毒活性，还使其具有一定 α 的抗氧化活性。 由本实验室保存；半胱氨酸缺陷型表达菌株Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ ２１（ＤＥ３）ｓｅｌＢ ｋａｎｃｙｓ５１Ｅ（ＢＬ２１ｃｙｓＥ５１）由德国慕尼 　　抗病毒多肽 ＧＢＶＡ１０是以ＧＢ肝炎病毒Ａ（ＧＢＶ ∷ Ａ）的ＮＳ５Ａ膜锚定区域氨基末端两亲性 螺旋序列为 黑大学Ｐｒｏｆ．ＡｕｇｕｓｔＢｃｋ和Ｄｒ．ＭａｒｉｅＰａｕｌｅＳｔｒｕｂ惠赠。 α 模板，经过抗丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）实 含荧光素酶报告基因ｈＲＬｕｃ的 ＨＣＶ复制子细胞系