细胞融解方法 - sigma-aldrich.pdfVIP

〒140-0002東京都品川区東品川2-2-24天王洲セントラルタワー4Ｆ じっけんレシピ Tel: (03) 5796-7330 Fax: (03) 5796-7335 e-mail: sialjpts@ 細胞融解方法 ECACCなどから得られる細胞の多くは凍結されて発送されてきます。そのため細胞は使用する前に凍結からおこ さなければなりません。細胞を適切に融解することによりその後の細胞の生存率や状態が格段に向上します。 チューブのサイズや手順の詳細は各研究室のプロトコールなどを参考にしてください。 データシートを確認して細胞の取り扱いを確認する 温めた培地とフラスコの準備 細胞の準備 細胞を融解する 温めた培地で細胞を希釈する 適切な温度でインキュベートする 細胞を24時間後に観察する 必要な機器、試薬 • 細胞に最適な温度に温められた培地（細胞に添付されているデータシートを参照） • 70%エタノール • DMSO （製品番号：D2438） • トリパンブルー（製品番号：T8154） • 個人保護用具（ラボ手袋、ラボコート、保護めがね等）、液体窒素タンク用の皮手袋など • 凍結バイアルを運ぶためのコンテナー（発泡スチロールのケースなど） • 適切な温度に温められたウォーターバス（通常は37℃） • インキュベーター • 培養用フラスコ（T-75 など）とラベル（製品番号： SIAL0641 など） • 倒立顕微鏡、相位差顕微鏡 • 血球計算盤（ヘモサイトメーター) ：（製品番号 Z359629） • 遠心分離機 • マーカーペン（シグママーカー：製品番号 S5894 S5769など） お問い合わせ先： • 駒込ピペット 製品の技術的なご質問sialjpts@ 価格・在庫のご質問sialjpcs@ • バイアルを立てるラック 2013.07 〒140-0002東京都品川区東品川2-2-24天王洲セントラルタワー4Ｆ じっけんレシピ Tel: (03) 5796-7330 Fax: (03) 5796-7335 e-mail: sialjpts@ 手順 1. 入手した細胞の培養条件を理解するために添付のデータシートを必ず読んでください。 2. フラスコの準備 ― フラスコに継代数、細胞名、ロットナンバー、日付を記録したラベルを貼ってください。 3. 細胞の入った凍結チューブを液体窒素タンク、もしくはドライアイスから取り出します。凍結チューブを取り出す ときは各研究室の手順に従い、適切な防護（皮手袋など）をしてください。 4. 凍結チューブ内には液体窒素が侵入していることが少なくありません。液体窒素から出したチューブのキャップ を4分の一回転ほどしてプラスチックの広口ビンなどにすばやく入れて様子を見てください。音が出ないようでし たらキャップを締め直して下さい。液体窒素が消えたらなるべく急速に解凍するために、ピンセットで凍結 チューブのフタ部分を保持して37℃のウォーターバスにつけます。凍結した液の少し上くらいまでをウォーターバ スに浸し、フタのパッキング部分まで浸らないように注意してください。チューブをウォーターバス内で動かし、均 一にチューブ内が急速に温まるようにします。内部の凍結液が融けてきたらチューブを静かに振りませ速やか に融けるようにします。この手順は細胞のダメ