口蹄疫病毒非结构蛋白2犆基因在昆虫细胞中的表达及 - 畜牧兽医学报.pdfVIP

畜牧兽医学报 ， （ ）： １７２４１７３１ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 口蹄疫病毒非结构蛋白 基因在昆虫 ２犆 细胞中的表达及应用 ， １ ２ ２ １ ２ ２ ２ ２ 张小丽 ，卢曾军 ，马小军 ，曹轶梅 ，付元芳 ，刘在新 ，谢庆阁 （ 甘肃农业大学动物医学院，兰州 ； 家畜疫病病原生物学国家重点实验室， １． ７３００７０２． 国家口蹄疫参考实验室，中国农业科学院兰州兽医研究所，兰州 ７３００４６） 摘 要：研究口蹄疫病毒（ ）非结构蛋白（ ） 在区分灭活疫苗免疫动物与自然感染动物方面的意义。 ＦＭＤＶ ＮＳＰ２Ｃ 　 本研究将 基因，克隆到穿梭载体 ，将其转入含骨架载体 的 ，经蓝 ＦＭＤＶＮＳＰ２犆 ｐＦａｓｔｂａｃＨＴＢ Ｂａｃｍｉｄ ＤＨ１０Ｂａｃ 白斑筛选得到重组骨架质粒 。将 转染昆虫细胞 ，鉴定正确后，经 次增殖获得高滴度的 Ｂａｃｍｉｄ２Ｃ Ｂａｃｍｉｄ２Ｃ Ｓｆ９ ３ Ｐ３代病毒后，在 ＨｉｈＦｉｖｅ细胞中进行目的蛋白的表达。ＳＤＳＰＡＧＥ结果显示在 ＨｉｈＦｉｖｅ细胞中得到了相对分 ｇ ｇ 子质量约为 的目的蛋白 ， 及 结果显示，该表达产物对 感染动物阳 ３８．９３ｋｕ ２ＣＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎ ＤｏｔＥＬＩＳＡ ＦＭＤＶ ｇ 性血清有良好的反应性。以电泳纯化的 蛋白为抗原建立间接 ，检测健康非免疫动物、免疫动物及 ２Ｃ ＥＬＩＳＡ ＦＭ ＤＶ试验感染动物血清，结果表明２ＣＥＬＩＳＡ不但能区分免疫动物和感染动物的血清，而且还能检测 ＦＭＤＶ感染 早期动物血清中的 抗体。说明昆虫细胞表达的 蛋白可作为 疫苗免疫动物与自然感染动物鉴别诊断 ２Ｃ ２Ｃ ＦＭＤＶ 的良好抗原。 基因在 系统中的成功表达为建立通过检测几种 抗体，筛查感染及隐性带毒动物， ２犆 ＢａｃｔｏＢａｃ ＮＳＰ 净化畜群的方法奠定了基础。 关键词：口蹄疫病毒； 基因；昆虫杆状病毒；表达；应用 ２犆 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．６５９．６ Ａ ０３６６６９６４２０１１１２１７２４０８ 　　　　 　　　　 犈狓狉犲狊狊犻狅狀狅犳犖狅狀犛狋狉狌犮狋狌狉犪犾犘狉狅狋犲犻狀２犆狅犳犉狅狅狋犪狀犱