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小反刍兽疫病毒犘蛋白的表达、纯化及抗体的制备及 - 畜牧兽医学报
畜牧兽医学报 , ():
2010418 9951000
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小反刍兽疫病毒 蛋白的表达、纯化及
犘
抗体的制备及初步应用
翟军军,窦永喜,张海瑞,毛 立,蒙学莲,王秋霞,骆学农,才学鹏
(中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室
甘肃省动物寄生虫病重点实验室,兰州 730046)
摘 要:本文旨在对小反刍兽疫病毒 蛋白进行原核表达,并利用表达的蛋白制备抗血清,然后用于间接免疫荧
P
光检测。将构建好的 ( ) 重组表达质粒转化大肠杆菌构建 蛋白的原核表达体系。重组菌经
pET30a+ P P IPTG
诱导,用 电泳检测融合蛋白得到了表达。通过对表达条件的优化,确定了 蛋白在 、 诱导
SDSPAGE P 28℃ IPTG
浓度为 · -1的条件下诱导 ,可溶性 蛋白表达量最高。利用镍柱亲和层析法纯化可溶性的 蛋
0.2mmol L 6h P P
μ
白,然后以纯化的蛋白为抗原免疫小鼠,制备了多克隆抗体,其滴度最高可达 1∶25600,而且特异性好,表明获得
了 蛋白的多克隆抗体。同时利用所制备的抗体对 / 真核表达进行了间接免疫荧光检测。 蛋白在
P pcDNA3.1P P
大肠杆菌中得到了高效表达,并制备了特异性好、滴度高的抗血清,为研究 蛋白功能奠定了基础。
P
关键词: ; 蛋白;表达;纯化;抗体制备;应用
PPRV P
中图分类号: 文献标识码: 文章编号: ( )
S852.659.5 A 03666964201008099506
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