GB/T 18935-2003口蹄疫诊断技术.pdf

ICS 11.220 B 41 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB/T18935-2003 口蹄 疫诊 断技术 Diagnostictechniquesforfoot-and-mouthdisease 2003一01一10发布 2003一05一01实施 中 华 人 民 共 和 国 发 布 国家质量 监督检验检疫 总局 CB/T 18935-2003 月U 舌 口蹄疫(food-and-mouth disease,简称FMD)是哺乳动物的一种接触烈性传染病，可引起易感偶蹄 兽潜在的严重经济损失。被世界动物卫生组织〔World Organization for Animal Health(英),Office In ternational des Epizooties(法),OIE〕列为A类疾病，我国3il为一类动物疫病。FMD病毒有7个血清 型，分别为O, A,(.,SATI , SAT2 , SAT3和Asial。本病临床上表现为口、舌、唇、鼻、蹄、乳房等部位发 生水泡、破溃形成烂斑 FMD在临床上不易与其他水泡性疾病(猪水泡病、水泡性疹和水泡性口炎) 区别。 木标准的诊断方法参考OIE《诊断试验和疫苗标准手册))(200。版)的推荐方法，并结合我国有关动 物防疫法，以及相关政策和法规制定的。在技术上与国际先进技术保持一致。其中病毒中和试验、液相 阻断酶联免疫吸附试验是国际贸易指定试验。 本标准的附录A、附录B和附录C是规范性附录 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:中国农业科学院兰州兽医研究所 木标准主要起草人:朱彩珠、卢永干。 标准分享网 免费下载 GB/T18935-2003 口蹄 疫 诊 断技 术 范围 本标准规定了口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)的微量补体结合试验、食道探杯 查毒试验、反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)，病毒中和试验、液相阻断一酶联免疫吸附试验、病毒感染相 关抗原(VIA)琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验的技术要求。 本标准所规定的试验技术适用于检测各种不同样品中的口蹄疫病毒抗原或抗体。 2 微f补体结合试验 21 材料 2.1.1样品采集和抗原制备 样品的采集、保存和运送的方法和要求见附录A. 2.1，2 抗原制备:在无菌室内将水泡皮或乳鼠胭体用磷酸盐缓冲液(PBS)洗净，用灭菌滤纸吸干后 称重。放在灭菌研钵中先剪碎，后加灭菌石英砂研磨。加磷酸盐缓冲液(PBS)(pH7.4)制成1，4悬 液。水泡液也以PBS作 1:4稀释，可与组织悬液合并。室温浸毒 2h以上，或 4℃冰箱过夜。 3000r/min离心10min。分离出上清液;58C水浴灭活40min。再3000r/min离心10min。取上清 液为待检抗原 2.1.2 抗体 口蹄疫病毒O,A和亚洲一1型，及猪水泡病病毒((SVDV)豚鼠高免血清。 2.1.3 补体 健康成年公豚鼠新鲜血清。加保存液(Richardson’液)后，可4℃保存6个月。使用前滴定效价。 2.1.4 溶血素 兔抗绵羊红细胞抗血清，使用前滴定效价。 2.1.5 红细胞 成年健康绵羊红血球。试验当天制备2.8%工作液和敏化红细胞。 2.1.6 主要仪器和器材 U”形底96孔微量滴定板，微量可调移液器及配套尖头，转头经改装可插人微量板的离心机，光电 比色计。 2.1.7 缓冲液配制方法(见附录B) 2.2 预备试验 %红细胞是液的制备 将脱纤的(绵羊)红细胞用VBD洗涤 3次。每次加 5倍于红细胞体积的VBD轻摇混匀， 1500r/min离心10min。吸去上清液后再加人VB