离子交换法去除流脑多糖疫苗粗糖中的杂蛋白.PDFVIP

GE Healthcare 应用指南 层析填料 离子交换法去除流脑多糖疫苗粗糖中的杂蛋白 致病菌的荚膜多糖往往能引起较强的人体免疫反应，是细 菌的主要抗原物质，通常用来制作疫苗，在疫苗的制备过 程中要尽可能将多糖提纯，去除菌体蛋白以及核酸等物质， 以减少毒副反应。目前绝大部分的多糖疫苗生产中使用苯 酚来去除杂蛋白，苯酚具有很强的毒性，给生产操作者的 健康带来威胁，对环境具有严重危害，其残留也影响制品 的质量，并且苯酚抽提的方法也不适合大规模工业化生产 操作，能否找到一种更安全并且适合放大生产的方法是很 多多糖疫苗生产者所关心的问题。通用电气在生物大分子 纯化领域具有超过50年的丰富经验，具有填料、设备和技 术上的优势，这篇应用主要描述了一种新型多模式离子交 换填料CaptoTM adhere在A群和C群流脑多糖疫苗纯化中的 ÄKTATM avant 应用，主要目的是验证使用层析法替代苯酚法去除流脑多 糖粗糖中杂蛋白的效果，为多糖疫苗的纯化及工艺改进做 Capto adhere采用新型的高流速琼脂糖做基架，机械强度 些有益的探索。 高，流速快，具有良好的传质能力，载量高，偶联多模式 的离子交换基团，具有与传统离子交换不同的选择性，是 关键词： Bioprocess家族中的新成员。 ÄKTATM avant 25 ；Capto adhere ；DEAE Sepharose FF ； 荚膜多糖；层析 前言 随着分离纯化技术的发展，快速、全自动、可重复性成为 目前工艺开发最为关心的三个方面。ÄKTATM avant由于其 全面的配置，具有很高的自动化程度，多柱切换阀方便用 Capto adhere的基团结构 来筛选填料，同时多波长在线检测目的物和杂质的存在， 非常适合自动化层析工艺的开发。 一、A群流脑粗糖中杂蛋白的去除 过程监测：由于A群流脑多糖含有磷酸根，能够吸收206nm 的紫外光，所以使用206nm监测多糖，同时开启280nm和 材料和方法 260nm，以280nm波长监测杂蛋白，以260nm波长监测核酸。 层析柱和设备：在填料筛选和工艺优化时采用了柱体积为 样品检测：由于很多物质在206nm处都有吸收，所以从Capto 1ml的HiTrap预装柱，在放大时采用了XK 16/20空柱自行装 adhere柱上洗脱下来的样品需要用HiTrap Desalting脱盐换 填20ml填料，使用ÄKTATM avant 25进行纯化。