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姜黄素抑制培养的人胚胎视网膜色素上皮细胞增殖及炎前因子分泌的实验分析
姜黄素抑制培养的人胚胎视网膜色素上皮细胞增殖 及炎前因子分泌作用的实验研究 摘要 目的 l、研究姜黄素是否抑制体外培养的人胚胎视网膜色素上皮细胞 (hfRPE细胞)增殖和重组人白介素卜B(rhIL-1B)刺激hfRPE细 胞分泌炎性因子IL-8和sICAM-1。 B(N卜K 2、探讨核转录因子K B)在其中的作用，从而探索针对 NF—K B的药物治疗增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的可能性。 方法 1、用已经成熟的酶消化法分离人胚胎RPE细胞，进行形态学观 察并用免疫组织化学法做抗人角蛋白抗体鉴定。取3-6代细胞用于实 验。 p 2、四唑盐．(MTT)比色法检测不同浓度(0，2．5，5，10，20 响，根据A值计算出相应的细胞增殖抑制率。 la 3、流式细胞术(FCM)分析不同浓度(0，5，10，20 g／m1)姜黄素 处理hfRPE细胞24h后细胞周期的改变和细胞凋亡率变化。 4、ELISA法检测rhIL-1 步后分为四组：(互)rhIL一1B干预组；(虿)rhIL—lB+姜黄素组，姜黄素 分5ug／m1和10lag／ml两个浓度；③姜黄素组，只分别加入5ug／ml u 和lO 本干预蛳后收集培养上清液和该孔细胞蛋白裂解液。用ELISA法检 量，每孔上清中的IL-8和sICAM-1含量与相应细胞蛋白含量之比 (pg／mg)表示该孔细胞的IL一8和sICAM一1分泌量。 B活化：hfRPE细胞经含 5、免疫荧光染色检测hfRPE细胞NF—K B 0．4％FBs的DMEM／F12同步后分为四组：①rhIL-15ng／ml干预组， 13 ug／m1 加药30min后收集玻片；②rhIL一1 5ng／ml+姜黄素组，分5 u 和10 B干预 g／ml两个浓度，先加姜黄素预处理1h，再加入rhIL一1 u u 30min收集玻片；③姜黄素组，分为5 g／ml和10 g／ml两个浓度， 光阳性者细胞占全部细胞的百分数。 6、用基于ELISA的NF—K Bp65活性测定试剂盒观察经不同处理 的hfRPE细胞核转录因子NF—K B活性：hfRPE细胞经含0．4％FBS的 B DMEM／F12同步后分为七组：(DrhIL一1 5ng／ml干预组，加药30min B u u 后收集细胞；(窑)rhIL～1 5ng／ml+姜黄素组，分5 g／ml和10g／ml 两个浓度，先加姜黄素
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