教 案 课程名称 生物化学实验（一） 授课对象 11生科 主讲教师 向玉勇 .docVIP

教 案 课程名称 生物化学实验（一） 授课对象 11生科 主讲教师 向玉勇 2012-2013 学年度 一 学期 实验一 糖的颜色反应和还原作用 一、实验目的了解糖类某些颜色反应的原理学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。? 掌握测定糖还原作用的原理和具体操作方法并了解掌握多糖的性质。 实验原理（一）α-萘酚反应（Molisch反应）。 糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物后者能与α-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异应。间苯二酚反应（Seliwanoff反应）在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮糖的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。在实验条件下蔗糖有可能水解而呈阳性反应 （三）ling试剂和Tollens试剂），它们是还原性糖。并且能与过量的苯肼反应生成具有一定晶形和熔点的脎，借此可以鉴别不同的糖。无半缩醛羟基的二糖或多糖不能通过开链结构互变，不能与碱性弱氧化剂反应，它们是非还原性糖。 三、器和试剂? 2．试剂 （1）莫氏（?Molisch）试剂：?5％?α-萘酚的酒精溶液1500mL称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体??积达100mL，贮于棕色瓶内。用前配制。（21％葡萄糖溶液?100mL??（3）1％果糖溶液?100mL? ?（4）1％蔗糖溶液?100mL? ?（5）1％淀粉溶液100mL? ?（6）0.1％糠醛溶液?100mL? ?（7）浓硫酸 500mL 塞氏（Seliwanoff）试剂?0.05％间苯二酚-盐酸溶液?1000?mL? ?称取间苯二酚0.05?g溶于30?mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100?m L?试剂：溶85g柠檬酸钠及50g无水碳酸钠于400ml水中。另溶 8.5g硫酸铜于50ml热水。将硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅， 如有沉淀可过滤。此溶液可长期使用。 ?稀碘液； 10%NaOH； 20%硫酸； 10%碳酸钠 ? 实验步骤?? 1．α-萘酚反应（Molisch反应）取5支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、0.1％糠醛溶液各1mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。斜执试管，沿管壁慢慢加入浓硫酸约1mL，慢慢立起试管，切勿摇动。浓硫酸在试液下形成两层。在二液分界处有紫红色环出现。观察、记录各管颜色。 间苯二酚反应（Seliwanoff反应）取3支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液各0.5?mL。再向各管分别加入塞氏试剂?5?mL，混匀。将3支试管同时放入沸水浴中，注意观察、记录各管颜色的变化及变化时间。 （1）取3支试管中各试剂2ml，再分别加入1%葡萄糖、1%蔗糖、 1%淀粉1ml，置沸水浴中加热数分钟,取出，冷却，观察各管的变化。 ?（2）置少量的1%淀粉于白瓷板上，加1-3滴稀碘液，观察颜色。 ?（3）取试管一支，加1%淀粉液5ml，再加5滴稀碘液，摇匀后观察其颜 色。将管内液体分成3份，其中一份加热，观察颜色变化，冷却后再观察颜色变化。另两份分别加入乙醇或10%NaOH溶液，观察颜色变化并解释。 ? （4）在一小烧杯内加1%淀粉溶液25ml及20%硫酸5ml，放在沸水浴中加 热，微沸后每隔2分钟取出反应液2滴置于白瓷板上作碘试验。待水解完后另取反应液10滴，用10%碳酸钠溶液中和后，作班乃德试验，记录试验结果并解释 实验二 卵磷脂的提取和鉴定 一、实验目的学习和掌握卵磷脂的提取和鉴定方法；??? 了解卵磷脂生物学功能。 实验原理卵磷脂是甘油磷脂的一种。是细胞膜磷脂双分子层的重要成分。卵磷脂又称磷脂酰胆碱，在动植物体内均有、分布，在动物的脑、精液、肝、肾上腺和红细胞中含量较多，蛋黄中含量可达 8-10％。卵磷脂是两性分子，可溶于含少量水的非极性溶剂中(但不易溶于水和无水丙酮)，可用含少量的水的非极性溶（热95％乙醇）进行提取。新提取的卵磷脂为白色腊状物，与空气接触后，其不饱和脂肪酸链被氧化而呈黄褐色；卵磷脂中的胆碱，在碱性溶液中可分解为三甲胺，而具有特异的鱼腥味，可用于鉴定。 仪器和试剂? 实验材料： 鸡蛋黄 仪器： 电炉 蒸发皿 漏斗一套酒精灯等。 试剂： 95％乙醇10％NaOH溶液丙酮? 实验步骤??? 1卵磷脂的提取： 取蛋黄 2g，置小烧杯内，加入 15ml 热的95%乙醇，边加边搅拌，冷却后过滤，如滤液不清，需要新过滤，直至透明，后将滤液置蒸发血内蒸干，残留物即为卵磷脂。 三甲胺试验： 取制得的卵磷脂一半，置于试