基因的原核表达及活性分析prokaryotic expression of oc-iδd86.pdf

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, July 25; 24(7): 1194-1198 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 研究报告 OC-IΔD86 (Oryzacystatin-IΔD86)基因的原核表达及活性 分析 1 2 3 4 霍雨猛 , 何启伟 , 赵双宜 , 徐苑芳 1. 山东农业大学园艺科学与工程学院, 泰安 271018 2. 山东省农业科学院蔬菜研究所, 济南 250100 3. 山东大学生命科学院, 济南 250100 4. 济南北方农艺科学研究所, 济南 250100 摘 要: 根据 OC-I ΔD86 基因序列, 设计合成了 7 条寡核苷酸片段, 通过重叠延伸 PCR 技术合成了 OC-I ΔD86 基因, 利 用设计好的 BamH I/ Xho I 酶切位点将 OC-I ΔD86 基因克隆到原核表达载体 pet21b 中, 在 1 mmol/L 的 IPTG 诱导后 5 h, OC-IΔD86 融合基因在大肠杆菌中得到表达, 表达产物处于可溶状态, 其表达量占总蛋白的 11.4%, 可溶性蛋白的 16.4%; 利用 Ni-NTA 系统纯化该蛋白并经PEG20000 浓缩后, 活性分析表明该蛋白酶抑制剂在体外表现出对木瓜蛋白酶明显的 抑制作用。这为转 OC-I ΔD86 基因的抗根结线虫植物基因工程抗体制备, 以及进一步体内的抗根结线虫研究奠定了基 础。 关键词: OC-I ΔD86 , 重叠延伸 PCR, 抑制剂, 纯化 Prokaryotic Expression of OC-IΔD86 (Oryzacystatin- IΔD86) Gene and Analysis of Its Activity 1 2 3 4 Yumeng Huo , Qiwei He , Shuangyi Zhao , and Yuanfang Xu 1 College of Horticulture Science and Engineering, Shandong Agricultural University, Tai’an 271018, China 2 Institute of Vegetable, Shandong Academy of Agricultural Sciences, Ji’nan 250100, China 3 School of Life Sciences, Shandong University, Ji’nan 250100, China 4 Jinan North Institute of Agronomy, Ji ’nan 250100, China Abstract: According to the amino acids sequence of OC-IΔD86 gene and Escherichia coli codon usage, we synthesized this gene