a 型流感病毒血凝素蛋白s鄄棕榈酰化修饰的质谱分析 - 分析化学.pdfVIP

第44卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第10期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2016年10月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 1521~1527 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.160361 A型流感病毒血凝素蛋白S鄄棕榈酰化修饰的质谱分析 1 1 1 2 3 *2 *1 王子健摇 高 祥摇 杨静波摇 孙万春摇 吴东林 摇 彭其胜 摇 刘 宁 1(吉林大学第二医院,长春 130041) 2(吉林大学人兽共患病研究所,人兽共患病研究教育部重点实验室,长春 130062) 3(吉林省疾病预防与控制中心,长春 130041) 摘摇 要摇 蛋白质S鄄棕榈酰化修饰是指棕榈酸分子通过硫酯键共价结合在蛋白质分子的半胱氨酸(S)的巯基 侧链上,是蛋白质脂类修饰的重要形式之一,在细胞信号转导、代谢等过程中起着重要作用。 本实验首先利用 酰基鄄生物素置换反应,将A型流感病毒血凝素蛋白上的S鄄棕榈酸分子转换为含有生物素(Biotin)分子的标 签。 生物素标记蛋白经特异性富集、电泳分离纯化后,进行胶内水解。 再利用质谱技术对水解混合物进行分 析。 结果表明,经酰基鄄生物素置换方法处理A 型流感病毒裂解产物后,蛋白质耦联生物素的浓度(羟胺处 理,+Hydroxylamine)与空白对照组(未加羟胺处理,鄄Hydroxylamine)的比值大于3;对经富集后的流感病毒血 凝素蛋白进行了质谱分析,鉴定了A 型的两个 S鄄棕榈酰化修饰位点,分别位于蛋白羧基末端的Cys 和 562 Cys 。 本研究为大规模研究S鄄棕榈酰化修饰蛋白提供了一种特异、有效的分析方法。 565 关键词摇 流感病毒,血凝素蛋白,酰基鄄生物素置换,S鄄棕榈酰化 1摇 引摇 言 蛋白质的S鄄棕榈酰化修饰是指饱和十六碳棕榈酸盐通过硫酯键共价修饰到蛋白质半胱氨酸的巯 [1] 基上 ,是蛋白质翻译后脂质共价修饰的重要形式。 S鄄棕榈酰化修饰是一种可逆修饰,在细胞信号转 导、癌症、神经传递、以及细胞膜间运输发挥着重要作用[2~4]。 尽管脂质对蛋白的修饰作用尤其是S鄄棕 榈酰化修饰的重要性得到了广泛共识,人们对这类蛋白质修饰很多方面的了解仍然不足,在这个研究领 [5] 域中的缓慢进展也在很大程度上反映了其研究方法的所面临的巨大挑战 。 早期对蛋白质S鄄棕榈酰 [6,7] 化修饰的分析,主要是利用质谱技术对含有S鄄棕榈酰化修饰的蛋白片段进行直接测定 。 这种方法 一般需要首先对特定的目的蛋白进行分离纯化,这对于疏水性较强而含量较少的棕榈酰化修饰蛋白而 言,无论是分析的灵敏度和通量,都是不小的挑战。 近年来,发展了多种蛋白质S鄄棕榈酰化修饰的分析 [8] 表征方法,主要都是通过对S鄄棕榈酰化修饰的特异性标记,达到对其表征和分析的目的 。 这些方法 主要分为体内代谢标记法[9~11]和体外化学标记法[12~14]两大