pmepa1蛋白的原核表达、纯化及其抗体制备 - 山东大学学报（理学版）.pdfVIP

　第４７卷　第３期 山　东　大　学　学　报　（理　学　版） ２０１２年３月　 　 　 　 　 　 　Ｖｏｌ．４７　 Ｎｏ．３　 　 　 　 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ｍａｒ．２０１２　 　文章编号：１６７１９３５２（２０１２）０３００１００４　　　ＤＯＩ：１０．６０４０／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１９３５２．２０１２．０３．００３ ＰＭＥＰＡ１蛋白的原核表达、纯化及其抗体制备 许丽红，罗深恒，王莎莎，侯国丽，刁爱坡 （天津科技大学生物工程学院，天津３００４５７） 摘要：为了从蛋白水平上检测前列腺跨膜蛋白ＰＭＥＰＡ１（ｐｒｏｓｔａｔｅｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔａｉｎ，ａｎｄｒｏｇｅｎｉｎｄｕｃｅｄ１）在细胞 内的表达和功能，构建了原核表达重组质粒ｐＴｒｃＨｉｓＡＰＭＥＰＡ１和ｐＧＥＸ４Ｔ２ＰＭＥＰＡ１，转化大肠杆菌ＢＬ２１ＲＩＰＬ 后，ＩＰＴＧ诱导蛋白表达，分别用ＮｉＮＴＡ和谷胱甘肽琼脂糖凝胶层析柱纯化蛋白。用ＨｉｓＰＭＥＰＡ１免疫兔子制备抗 体，并用ＧＳＴＰＭＥＰＡ１对抗体进行纯化。免疫印迹检测显示抗体能够特异识别细胞中内源ＰＭＥＰＡ１蛋白。 关键词：ＧＳＴＰＭＥＰＡ１；ＨｉｓＰＭＥＰＡ１；原核表达；抗体；纯化 中图分类号：Ｑ７８　　　文献标志码：Ａ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰＭＥＰＡ１ｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｉｔｓａｎｔｉｂｏｄｙｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ＸＵＬｉｈｏｎｇ，ＬＵＯＳｈｅｎｈｅｎｇ，ＷＡＮＧＳｈａｓｈａ，ＨＯＵＧｕｏｌｉ，ＤＩＡＯＡｉｐｏ （ＳｃｈｏｏｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＴｉａｎｊｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００４５７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｓｔｕｄｙｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＰＭＥＰＡ１ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｃｅｌｌｓ，ｔｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｓｏｆｐＴｒｃＨｉｓＡＰＭＥＰＡ１ａｎｄ ｐＧＥＸ４Ｔ２ＰＭＥＰＡ１ｗｅｒｅｍａｄｅａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１ＲＩＰＬｔｏｅｘｐｒｅｓｓｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎＨｉｓＰＭＥＰＡ１ ａｎｄＧＳＴｐＰＭＥＰＡ１．ＴｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙＮｉＴＮＡａｎｄＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙｒｅ ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＡｒａｂｂｉｔｗａｓｉｍｍｕｎｉｚｅｄｗｉｔｈｐｕｒｉｆｉｅｄＨｉｓＰＭＥＰＡ１，ｔｈｅａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔＰＭＥＰＡ１ｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｓｕｃｃｅｓｓ ｆｕｌｌｙ，ａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｕｓｉｎｇＧＳＴＰＭＥＰＡ１．Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｐｕｒｉｆｉｅｄａｎｔｉｂｏｄｙｃａｎｒｅｃｏｇｎｉｚｅｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ＰＭＥＰＡ１ｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｃｅｌｌｌｉｎｅｓ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＧＳＴＰＭＥＰＡ１；ＨｉｓＰＭＥＰＡ１；ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ａｎｔｉｂｏｄｙ；ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ 白质运输， ＤＮＡ修复，细胞凋亡等多种生命活动，并 ［７９］ ０　引言