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蛋白质的分析前言 - 宜兰大学食品科学系
蛋白質的分析
駱錫能
國立宜蘭大學食品科學系教授
1
前言
• 分子量: 5,000 – 1,000,000 道耳頓。
• 包含: 20種常見α−胺基酸,主要元素有: 氫、
碳、氮、氧、硫。
• 不同食品蛋白質中氮含量約13.4% - 19.1% 。
• 鹼性胺基酸含較多氮。
• 非蛋白氮可能來自: 游離胺基酸、小胜肽核酸
、磷脂、胺基糖、嘌呤和某些維生素、生物
鹼、尿酸、尿素和胺基離子等。
2
分析的重要性
• 生物活性測定:
如肉嫩化蛋白酶、水果熟成果膠酶、豆類胰蛋白
酶抑制因子。
• 功能性質調查:
小麥中麥醇溶蛋白和麥穀蛋白、牛乳中酪蛋白、
雞蛋中卵清蛋白
• 營養標示:
a. 總蛋白質含量
b. 胺基酸組成
c. 混合物中特定protein含量
d. 分離純化過程中蛋白質含量
e. 非蛋白氮
f. 營養價值(消化率、功效比氮平衡) 3
4
凱氏氮法(Kjeldahl method)
• 原理:
樣品中蛋白質和有機成分,在催化劑存在
下,硫酸消化,轉化氮成為硫酸銨,中和
後,將氨蒸餾至硼酸溶液中,形成硼酸銨
,再用標準酸滴定之。
因含其他非蛋白氮,故稱粗蛋白含量。
5
• 1883年Kjeldahl建立
• 目前改進:
1. 汞催化消化反應效果最佳,但毒性!
2. 二氧化硒:硫酸銅=3:1 ,最有效。
3. 銅與二氧化鈦混合亦可
4. 硫酸鉀提高硫酸沸點,加速消化
5. 氨直接蒸餾至硼酸溶液,再標準酸滴定
6. 採用奈斯勒(Nessler)比色法測定消化後
氨,換算其含氮量
6
微量方法及反應(1-2mgN)
• 樣品粉碎,經20 mesh過篩,混合均勻
• 消化: 消化至透明澄清,產生硫酸銨
7
• 蛋白質與硫酸作用的化學反應式如下:
• H2SO4 →SO2 + H2O + [O]
• 2CH3 .CH .NH2 .COOH + O2 →2CH3
.CHOH-NH2 + 2CO2
• 2CH3 .CHOH-NH2 + 5O2 → CO2 + NH3
+ 4H2O
• NH3 + H2SO4 → (NH4)2SO4
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9
10
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