h5n1 亚型aiv ha 抗原表位的高效表达及其抗原活性分析high level .pdfVIP

医学检验检疫杂志( 网络版), 2012 年, 第 1 卷, 第 2 篇, 第 7-14 页 Yixue Jianyan Jianyi Zazhi (Online), 2012, Vol.1, No.2, 7-14 http://jmiq .5 研究报告 Research Report H5N1 亚型AIV HA 抗原表位的高效表达及其抗原活性分析 庞耀珊 1 , 谢丽基 1 , 邓显文 1 , 谢志勤 1 , 刘加波 1 , 谢体三 2 , 谢芝勋 1 1 广西壮族自治区兽医研究所, 广西畜禽疫苗新技术重点实验室, 南宁, 530001; 2 南宁市蓝光生物技术有限公司, 南宁, 530007 通讯作者: xiezhixun@126.com 作者 医学检验检疫杂志, 2012 年, 第 1 卷, 第 2 篇 doi: 10.5376/jmiq .cn.2012.01.0002 收稿日期：2012 年 04 月 26 日 接受日期：2012 年 07 月 18 日 发表日期：2012 年 07 月 20 日 本文首次发表在 《基因组学与应用生物学》(2012 年第 31 卷第 2 期 109-116 页)上。现依据版权所有人授权的许可协议，采用 Creative Commons Attribution License 对其进行授权，再次发表与传播。只要对原作有恰当的引用, 版权所有人允许并同意第三方无条件的使用与传播。 建议最佳引用格式： 引用格式( 中文) ： 庞耀珊 等 , 2012, H5N1 亚型 AIV HA 抗原表位的高效表达及其抗原活性分析 , 医学检验检疫杂志(online) Vol.1 No.2 pp.7-14 (doi: 10.5376/jmiq .cn.2012.01.0002) 引用格式(英文) ： Pang et al., 2012, High Level Expression and Antigenic Analysis of H5N1 AIV Hemagglutinin Epitopes, Yixue Jianyan Jianyi Zazhi (online) Vol.1 No.2 pp.7-14 (doi: 10.5376/jmiq .cn.2012.01.0002) 摘 要 血凝素(hemagglutinin, HA)蛋白是禽流感病毒(avian influenza virus, AIV) 的一个重要表面抗原性蛋白，在疾病诊断 和防治上有重要意义。本研究为了探讨一种更为简便有效的 HA 重组蛋白表达途径，利用生物信息学软件，对 H5N1 亚型 AIV HA 基因编码的氨基酸序列进行分析，在分析其在大肠杆菌中的密码子偏好性、稀有密码子分布情况及有关蛋白的抗 原性等重要特性后，构建了 HA 抗原表位重组表达质粒 pET-32a(+)-HA。经测试，该重组质粒在 1 mmol/L IPTG 诱导剂作 用下诱导过夜，能在大肠杆菌 Rosetta-gami B (DE3) 中高效表达，并得到 48.1 kD 大小的目的重组表达蛋白。重组蛋白用 6×His-tagged protein 纯化试剂盒纯化后，与福氏佐剂等量混合制备成抗原，以200 μg/鸡的剂量皮下注射 2 月龄 SPF 鸡 3 次， 采血分离血清。Western-Blot 试验结果表明，该重组表达蛋白能分别与所制备的高免鸡血清及 H5N1 亚型 AIV 阳性血清发 生特异性反应，在硝酸纤维素膜上出现特异性杂交带。说明本试验研究的 HA 抗原重组表达蛋白具有良好的免疫原性和反 应原性，保留了 HA 蛋白的抗原活性，提示该重组蛋白在 H5 亚型 AIV 的防治技术研究中具有重要的实际应用价值。 关键词 禽流感病毒( AIV); H5N1 亚型; 抗原表位; 表达 High Level Expression and Antigenic Analysis of H5N1 AIV Hemagglutinin Epit