一、材料和仪器1.海拉细胞（ATCC#CCL-2）.PDFVIP

一、材料和仪器 1. 海拉细胞（ATCC#CCL-2 ） 2. 96 孔聚苯乙烯板（Fisher#07-200-91;Corning#3598 ） 3. MTT 细胞增殖试剂盒（ATCC#30-1010K） 4. 胶原I （Sigma-Aldrich#C7661 ） 5. 密理博（D-MEM）高糖培养基DMEM （Invitrogen#10313-021 ） 6. 胎牛血清（ATCC#30-2020 ） 7. 0.5 M EDTAsolution 8. 牛血清蛋白（Invitrogen#15561-020 ） 9. PBS （Invitrogen#14190-144） 10. 37°C 细胞培养孵育箱及5%CO2 11. 可以在吸收光570 nm 下使用96 孔板测量的分光光度计。 二、步骤 1. 在含有10%FBS 的DMEM 培养基中培养细胞。 2. 制备含有40 μg/ml 胶原I 的PBS 溶液，4°C 保存；含有0.1%BSA 的DMEM。 3. 将96 孔板每孔加入30 μl 胶原溶液覆盖，置于4°C 。 4. 覆盖12 小时后，去除胶原溶液，在组织培养罩中于室温下风干平板。 5. 在吸附试验前用血清去除细胞8 小时，再用无血清的DMEM 洗三次细胞。在DMEM 中培 养细胞。 6. DMEM 中加入EDTA 使终浓度为10 mM，用以分离细胞。显微镜下观察细胞确保细胞完全 分离，分离过程需要约10 分钟。 7. 用无EDTA 的DMEM 清洗细胞两次；用含有0.1%BSA 的DMEM 重悬细胞，使细胞在DMEM 5 中的浓度为2×10 cells/ml 。 8. 为了进行细胞吸附试验，在用血清覆盖的96 孔板的每孔中加入步骤7 中的100 μl 细胞悬 赫贝公司总部地址: 杭州市文一西路 1378 号杭州师范大学科技园F 楼7 层 电话：0571；传真：0571 南京分公司地址：南京市鼓楼区童家巷24 号中国药科大学 ；025-mail ：sale@ 网址： 浮液。将平板置于37°C 培养细胞20 分 钟，使细胞附着在表面。 9. 每孔加100 μl DMEM 洗掉没有附着的细胞，重复四次。 10. 注意：为保证实验的一致性，多板操作时可用排枪缓慢加入或移除DMEM。 11. 洗后，加入含有10%FBS 的DMEM，37°C 孵育细胞4 小时。 12. 每孔加10 μl MTT 底物，30°C 孵育细胞2 小时。 13. MTT 处理过的细胞会被裂解，用分光光度计在570 nm 检测溶液吸光值。 14. 注意：可以考虑加入下列对照组来检测每一步实验：没有用胶原I 覆盖的96 孔板；没有用 DMEM 洗的96 孔板；没有加细胞的96 孔板；没有加MTT 的96 孔板。 赫贝公司总部地址: 杭州市文一西路 1378 号杭州师范大学科技园F 楼7 层 电话：0571；传真：0571 南京分公司地址：南京市鼓楼区童家巷24 号中国药科大学 ；025-mail ：sale@ 网址：