UVP BioSpectrum 成像系统和BioLite 多谱光源在蛋白印迹多重近红外.PDF

Application UVP BioSpectrum 成像系统和 BioLite 多谱光源 在蛋白印迹多重近红外成像上的应用 使用 BioSpectrum 系统和 BioLite 多谱光源进行近红外（NIR ）成像具有快速、高 效和简单的特点。 可选择多种激发和发射滤光片 ，使研究者可以检测和定量几乎任何的荧光染料 （从可见光到近红外）。蛋白印迹是一种为了确定是否存在一种或多种蛋白的常规技 术，并提供蛋白数量额外的信息。 整个制备、成像过程是简单的，使用 SDS胶首先通过大小来分离蛋白，接 着通过电转移将蛋白转移至醋酸纤维素膜或 PVDF 膜上。 图 1 免疫印迹过程 注 ：蛋白印迹是生命科学研究实验室中的基础，通过 SDS分离、印迹、抗体探查和分析完成 膜表面吸收蛋白，研究者使用一抗来探查膜上特定的蛋白。酶或荧光染料标记的 二抗用于识别一抗的结合位点。若单一特定蛋白被识别，则使用一种单抗和标记物。 若在同一个印迹中识别到多个蛋白，则分析依赖于不同的一抗探查每个蛋白及携带不 同荧光标记的二抗 ，产生多重结果。 对于近红外印迹应用，通常使用两种荧光染料，或独立使用，或联合使用 （表 1 ）。 表 1 用于近红外成像的滤光片（680nm 和 770-800nm 荧光标记） 滤光片 蛋白标签-发射光 备注 激发光（nm ） 发射光（nm ） 680 nm 770-800 nm （BioLite ） （BioSpectrum ） 700-740 800 √ √ 双条带可见 只有 680 nm 条 600-645 700-740 √ 带可见 只有 800 nm 条 750-780 800 √ 带可见 通过直接连接到二抗上的荧光标签容易实现对结合到蛋白的一抗的检测。 对于荧光成像，通过顶置单色激发光 （BioLite ）照射印迹膜。每个标记点上诱导 的荧光通过制冷 CCD 记录（用于荧光的散射光滤光片并阻隔激发光 ）。图2 显示处理 的NIR 印迹来识别样品中的两种蛋白。 图2 同一个免疫印迹上的多重近红外印迹（红：COX IV 抑制剂；绿：微管蛋白稀释液） 注 ：该近红外成像时的发射波长分别为 680 nm 和 800 nm 【材料与方法】 BioSpectrum 615 系统，320 万物理像素相机（-60℃相对温度）和 5 个散射光滤 光片。 BioLite 多谱光源，带 8 个激发光滤光片。 近红外专一性激发光和散射光滤光片（表 1 ）。 用于近红外蛋白印迹操作的试剂。 【样品制备】 HeLa 细胞稀释液（两倍）通过 SDS（12%丙烯酰胺凝胶）分离。分离的 蛋白转移至硝酸纤维素膜上。使用小鼠 anti-α微管蛋白和兔 anti-COX IV 一抗（缓冲液 带 0.1%Tween-20 ）来探查印迹 ，4℃过夜 ；接下来在室温培育一小时 （二抗：羊anti