【江苏】2015-2016学年中职畜禽繁殖与改良（主编李青旺、胡建宏 高教版）教案：5.6 精液的保存和运输.docVIP

课题：【学习目标】 【】【自主】【】【检测 】【检测】 3. 保存适合猪的精液。 4. 三、简答题 1.精液保存的意义。 2.精液保存的方法及保存温度。 3.精液冷冻保存的原理，简述玻璃化假说和甘油保护学说。 4.牛精液冷冻的程序。 5.液氮的特性及使用注意事项。 6.液氮罐使用注意事项。 所需设备简单，特别适合猪的精液。 (一)原理 常温保存是通过增加酸度，降低精液的pH来抑制精子的代谢活动，以减少其能量消耗。酸性在一定范围内是可逆抑制，通常把pH调整到6.35左右。 (二)方法 1.向稀释液中充入二氧化碳，如伊利尼变温稀释液(IVT)。 2.利用精子本身在代谢中产酸，自行调节pH，如康奈尔大学稀释液(CUE)。 3.向稀释液中加入有机酸，如己酸稀释液(CME)。 常温保存的稀释液除降低pH使精于代谢减慢外，还依靠给精子补充足够的养分，同时加入抗菌物质以抑制细菌的孳生。有的还在稀释液中加入缓冲物质；有的加入明胶以阻止精子运动。 二、精液低温保存 (一)原理 在体温状态下，精子的代谢正常，当温度降低时，精子的代谢活动减慢，当温度降至0～5℃，精于的代谢较弱，几乎处于休眠状态。此时精子的物质代谢和能量代谢均降到较低水平，废物累积减少，且此温下不利微生物的繁殖，故可达到保存目的。 (二)方法 精液进行低温保存时，应采取逐步降温的方法，并使用含卵黄的稀释液，以防冷休克。 首先把稀释后的精液按一个输精量(羊10～20个输精量)分装至一个容器中，封口，再包以数层棉花或纱布，最外层用塑料袋扎紧，防止水分渗入。把包装好的精液放到0～5℃的低温环境中，经1～2h，精液即降至0～5℃。在保存过程中，要维持温度的恒定，防止升温。如特殊情况或运输可用广口保温瓶进行，在保温瓶中加7～8成满的冰块，把包装好的精液放在冰块上盖好，注意定期添加冰块。如无冰源，可采用化学致冷法，在冷水中加入一定量的氯化铵或尿素，可使水温达2～4℃。 三、精液冷冻保存 精液冷冻保存是利用液氮(-196℃)或干冰(-79℃)作冷源；将精液处理后冷冻起来，达到长期保存的目的。精液冷冻保存是人工授精工作的一大进步，由于保存时间的延长，使精液的使用不受地区的限制，从而加快了家畜品种的育成和改良速度。 (一)精液冷冻保存的原理 精子在超低温下，其代谢几乎停止，以生命相对静止状态保存下来，当温度回升后，又能复苏且具有受精能力。其理论依据是玻璃化假说和甘油保护学说。 1.玻璃化假说 物质的存在形式有气态、液态和固态，其中固态又分为结晶态和玻璃态。在不同的温度条件下，这两种形式可以相互转化。 （1）结晶态 当精液的温度由冰点（0℃）逐渐降到-60℃左右时，精液中的水分由液态变成固态，其结构按几何图式进行有序排列，冰晶颗粒大而均匀，叫做结晶态或冰晶化。精液在形成结晶态时，由于缓慢降温，精清中的水逐渐形成冰茬儿，精子被排斥到没有冻结的那部分精液中，形成高渗液，造成精子内外渗透压差距增大，使精子失水干固而死亡；同时由于冰晶在扩展移动中，对精子长生机械压力，破坏精子原生质表层和内部结构，也可引起精子死亡。因此，缓慢降温形成冰晶化是造成精子死亡的主要原因。 （2）玻璃态 指当精液由低温骤然降到-60℃度以下，精液变成固态时，其结构图式进行无序排列，冰晶颗粒细小而均匀，叫做玻璃态（化）。精液在形成玻璃化时，由于快速降温，精清中的水分，在精子周围迅速形成一层玻璃化膜，将精子保护起来，同时使精子迅速进入休眠状态；当解冻快速升温时，则玻璃态又可跨越结晶态直接变为液态，使精子复苏而恢复受精能力。 经试验证明，在0～60℃是冰晶形成的温度区域，而且在逐渐降温的条件下才能形成。降温越慢，冰晶形成越大，尤以-15～25℃为甚。玻璃化必须在-60～-250℃的低温区域内，经快速降温，迅速越过冰晶化而形成。 2.甘油保护学说 快速降温可使精液跨越结晶态进入玻璃态，但急剧降温会造成精子冷休克。研究表明，向稀释液中添加甘油，不但可增强精子的抗冻能力，而且又可防止冰晶化和精子冷休克。 甘油又名丙三醇，分子式CH2（OH）－CH2（OH）－CH2（OH），为高热能脂肪家族，其3个羟基（OH）为亲水基团，可与精液中的水结合，限制和干扰水分子的晶格排列，而产生冰晶；其烃链为疏水基团，朝向精子，可阻止精子的内外水分相互渗透，从而使精子保护在玻璃化膜中。 但是，甘油浓度高时，对精子有危害作用，应掌握甘油的用量。一般牛冷冻精液中甘油通常加入5％～7％。 除甘油外，其他多羟化合物如二甲基亚砜(DMSO)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、糖类等都具有抗冻作用。 (二)精液冷冻技术 牛的精液冷冻已普及，现以牛精液冷冻为例，将精液冷冻制作技术叙述如下： 1.采精及精液品质搂查 精液冷冻效果与精液品质密切相关。做好