微生物分离.pptVIP

云南腾冲热泉 第七节 生物可降解塑料菌株的分离筛选 三、ＰＨＡ合成特点和发酵特点 发酵过程需要充足碳源 发酵初期氮源要丰富，供氧要充足；使菌体大量生长；细胞浓度达到一定程度时，减少氮源供应，降低溶解氧，有利于PHA合成 第三节 好氧微生物的分离 二、利用平皿中的生化反应进行分离 ２、变色圈法 在平板培养基中加入指示剂或显色剂，快速筛选微生物 如：果胶酶产生菌、谷氨酸产生菌、解脂微生物、内肽酶、乙醇等 二、利用平皿中的生化反应进行分离 ２、变色圈法 如：果胶酶产生菌 在单菌落周围加入几滴1% CTAB （溴化十二烷基三甲基铵），静置10min 若有透明圈产生则为碱性果胶酶产生菌 二、利用平皿中的生化反应进行分离 ２、变色圈法-----解脂微生物分离 Fryer改良的双层法，先在平民内倒一层营养琼脂把一张棉纸圆片在被维多利亚蓝染了色的乳脂中浸湿，铺在已凝固的琼脂表面，然后覆盖一薄层含样品的营养琼脂，保温培养，解脂菌落可以在棉纸中产生蓝带 二、利用平皿中的生化反应进行分离 ２、变色圈法-----分离内肽酶产生菌 方法1：用酪蛋白作底物产生透明圈鉴别 方法2：用吲羟乙酸酯为底物加到分离培养基内，产生蛋白酶的菌落水解吲羟乙酸酯为3-羟基吲哚，后者能氧化生产蓝色物质，根据呈色圈可选出平板上产蛋白酶菌落。 二、利用平皿中的生化反应进行分离 ３、生长圈法——筛选氨基酸、核苷酸、维生素产生菌 采用对应的营养缺陷型作工具菌； 高浓度工具菌混合基本培养基倒平板后， 涂布待检菌，适当温度培养一段时间 某菌落周围形成浑浊的生长圈， 该菌落可产生工具菌所需营养 第三节 好氧微生物的分离 二、利用平皿的生化反应进行分离 ４、抑菌圈法 —分离筛选抗生素产生菌 工具菌：抗生素的敏感菌 第三节 好氧微生物的分离 二、利用平皿的生化反应进行分离 ４、抑菌圈法 筛选产抗微生物的方法进展 采用联合检验菌 寻找新的微生物资源，如：海洋微生物 采用新的筛选方法，如：筛选抗霉菌抗生素时，先筛选抑制几丁质合成酶的生理活性物质，再从中筛选所需抗生素。 第三节 好氧微生物的分离 三、组织分离法——从有病或特殊组织分离菌株 １、对一般有病组织的分离方法 取材　　　冲洗　　　消毒　　　冲洗　　　培养 第三节 好氧微生物的分离 三、组织分离法 ２、食用菌孢子分离法——单孢子分离法 收集孢子　　　稀释分离单孢子　　　培养单孢子成菌落 　　　转入斜面，测定生产性能 第三节 好氧微生物的分离 四、单细胞或单孢子分离法 凹玻片 小滴分离纯化方法 将待纯化的孢子悬液稀释至1500个/mL，用校正口径的滴管（每毫升4000滴）吸取孢子悬液，均匀滴于无菌干燥盖玻片上，将盖玻片翻转盖于凹玻片的孔穴上，穴内加一滴已灭菌的培养液，盖玻片与载玻片用凡士林密封。显微镜观察，记录只有一个孢子的小滴位置，恒温培养，挑取单菌落。 第三节 好氧微生物的分离 五、通过控制营养和培养条件分离 1、培养基的营养成分 2、培养基的pH 3、排除不需要的菌类 4、控制培养温度 五、通过控制营养和培养条件分离 1、培养基的营养成分 六种营养因子 碳源/氮源 投其所好 五、通过控制营养和培养条件分离 2、培养基的pH 培养基的pH调节到被分离微生物要求的范围 如：分离碱性蛋白酶和碱性脂肪酶产生菌，可把培养基pH调到9~11，抑制其他微生物的生长 维持培养基pH相对稳定的方法： 加入磷酸盐 加入碳酸钙 五、通过控制营养和培养条件分离 3、排除不需要的菌类------加入专一性抑制剂 分离细菌 50u/mL制霉菌素 放线菌 0.05%十二烷基磺酸钠（SDS） 霉菌、酵母菌 青霉素、链霉素、四环素各30u/mL 根霉、毛霉 0.01%去氧胆酸钠或山梨醇 五、通过控制营养和培养条件分离 4、控制培养温度 高温微生物：最适温度50~60℃ 中温微生物：最适温度20~40℃ 低温微生物：最适温度15℃或更低 第四节 厌气微生物的分离 厌气菌工业菌种用途： 白酒增香、污水处理、水产养殖等 分离方法：加还原剂 划线分离法 焦性没食子酸法 平皿/试管厌气培养法 玻璃板隔绝空气法 生物吸氧法 第五节 野生型目的菌株的筛选和菌株鉴定 初筛 复筛 5 工业微生物产生菌的分离筛选 菌株鉴定 初筛：从大量分离到的微生物中筛选具有合成目的产物的菌株。 1、平板筛选 优点：简便、高效 2、摇瓶发酵筛选 优点：更接近发酵罐培养条件 透明圈法筛选蛋白酶产生菌