小鼠血虚证造模及四物汤治疗的血清白蛋白含量检测.PDFVIP

小鼠血虚证造模及四物汤治疗的血清白蛋白含量检测 黄玮 摘要：目的：观察分别用乙酰苯肼、环磷酰胺造模小鼠血清白蛋白(ALB)含量的变化，以及 四物汤治疗乙酰苯肼造模小鼠血清白蛋白含量的改变，并间接评估血清白蛋白作为血虚证小 鼠指标的特异性。方法：溴甲酚绿法（BCG ）。结果：只有乙酰苯肼造模使小鼠血清白蛋白 增高（P0.05 ），环磷酰胺虽然使小鼠血清白蛋白含量降低但无显著差异，四物汤的治疗作 用也不显著。结论：血清白蛋白在乙酰苯肼、环磷酰胺造模小鼠中的变化趋势不一致，因此 单纯以血清白蛋白作为血虚小鼠衡量指标的不合理；四物汤为补血名方，但对乙酰苯肼造成 小鼠血虚模型的治疗效果不明显。 关键词：血清白蛋白、血虚证造模、环磷酰胺、乙酰苯肼、小鼠 1、引言： 血虚证是祖国医学的常见证型之一，成因繁多，临床症状复杂，要深入地研究血虚证并 加强其临床治疗效果，有懒于良好的血虚证动物模型的建立。目前，血虚证动物模型（1、5 ） 的建立方法很多，但存在缺乏统一的衡量指标（3、4 ），血虚的状态不稳定等缺点。本实验 是采用了目前较简便的两种血虚证造模方法：乙酰苯肼、环磷酰胺，进行小鼠造模，结合小 鼠四诊（2 ）、血图片、骨髓图片、组织切片等，观察其造模后的血虚表现，以判断是否可纳 入。同时，用补血名方四物汤治疗模型组，反证。以检验、比较两种血虚证造模方法是否成 熟。并且，测定各组小鼠血清白蛋白含量，观察是否有关联的特异性改变，以期找到比较合 理、可靠的生化指标，为判断造模是否成功提供可定量的标准。 2、材料与方法： 2.1 试剂与药物：乙酰苯肼；环磷酰胺粉针剂；白蛋白试剂（溴甲酚绿、柠檬酸、柠檬酸二 钠、Brij-35 ）、蛋白标准液42.0g/L, 由上海申索试剂有限公司）；双蒸水（实验室自备）；中药 （生地、芍药、当归、川芎各3g，煎汤 130ml） 2.2 器材：台式离心机, 型号 TDL80-2B （上海安亭科学仪器制造厂）；722 分光光度仪计（上 海精密科学仪器有限公司）； 2ml 比色皿4 个；震荡器；移液枪 20ul 、1000ul 各一把，镊子 3 把，试管、试管架、枪头、卷纸若干 2.3 动物：实验昆明种小鼠，普通级，雄性，40 只 2.4 方法： 分组：将 40 只实验小鼠分为，正常组、环磷酰胺组、乙酰苯肼组、四物汤组 4 组，每 组随机 10 只小鼠。 造模：在 1、4 天用乙酰苯肼 1.7mg/10g 剂量皮下注射造乙酰苯肼组、四物汤组模型， 其它组注射等量生理盐水；在 1、2 天按环磷酰胺 1mg/10g 剂量腹腔注射造环磷酰胺组模型， 其它组注射等量生理盐水；同时，四物汤组每天灌服四物汤 0.5ml/只，其他组灌服等量生理 盐水。 采样：第 8 天行小鼠摘眼球取血，离心分离出血清。脱颈椎处死小鼠，做各项病理检测。 检测：取空白管 1 支、标准管 1 支、测定管 38 支（四物汤组有两只老鼠死亡）；根据预 实验结果，空白管加入双蒸水 4ul 、对照管加入蛋白标准液 4ul 、测定管分别加入各小鼠血 清样本 4ul ；各管再加入 1000ul 白蛋白试剂；震荡器上混匀，室温放置 10 分钟，以空白管 较零，0.5cm 光径，628nm 处测定吸光度。 白蛋白含量（g/L ）=测定管吸光度*标准液浓度/标准管吸光度 （一周后再测一次，其中乙酰苯肼组有一管丢失） 2.5 统计： Excel 简单数据处理，SPSS11.5 软件单因素方差分析、作图 3 、结果： 1 表 1 各组小鼠血清白蛋白（g/L ）比较 组别 正常组 环磷酰胺组 乙酰苯肼组 四物汤组 第一次测量 34.8373 6.70 30.9685 5.84 40.3270 3.39 * · 39.4512 3.07 · 白蛋白含量 第二次测量 28.0400 3.78 27.0267 4.12 31.8963 2.49* · 30.6500 4.0