能量代谢调节对MG132和紫杉醇联合用药的影响.pdfVIP

广州医学院 2007 级硕士论文 能量代谢调节对 MG132 和紫杉醇联合用药的影响 材料和方法 1 材料 1.1 细胞株：K562 细胞株： 购自中国科学院血液学研究所；人乳腺癌 MCF-7 细胞 株，购自广州医学院实验中心。 1.2 试剂：紫杉醇（Paclitaxel ，海南中化联合制药工业有限公司生产，国药准字 ）;D-G （汕头市光华化学厂）；L-G （上海西域机电有限公司）；MG132 （Alexis ）；紫杉醇溶于NS -20 ℃保存，MG132 溶于 DMSO -20 ℃保存。 2 方法 2.1 细胞培养：K562 细胞培养于 RPMI1640 完全培养基中，隔天传代一次；MCF-7 细胞培养于 RPMI1640 培养基中，每两天用 0.25%胰蛋白酶（含 EDTA ）消化传代一 次；置于 37℃ 5% CO2 培养箱中培养。D-G 及 L-G 完全培养基为含 10% 胎牛血清 的无糖 RPMI1640 中分别添加 D-G 或 L-G ，并使其终浓度分别为 2g/l 。实验取对数 生长期细胞传代离心，调整细胞浓度，用以上配好的 D-G 或 L-G 完全培养基重悬细 胞，并按以下实验分组进行实验。 2.2 实验分组：实验分为阴性对照组、紫杉醇组、MG132 组以及紫杉醇联合 MG132 组。MG132 和紫杉醇的浓度根据不同的实验有所不同，紫杉醇的浓度范围是 20nM/L～10μM/L ，MG132 的浓度范围是0.625μM/L～10μM/L 。 2.3 细胞活力测定：MTS 法检测 MG132 与紫杉醇对 K562 细胞及 MCF-7 细胞活力的 影响，以及确定适当的浓度范围。 2.4 MG132 与紫杉醇对 K562 细胞死亡情况的影响：采用流式细胞术以及荧光显微镜 观察各组细胞在两种供能条件下各组细胞的存活情况。 2.5 MG132 与紫杉醇对 K562 细胞凋亡蛋白 Bax 及 PARP 的影响：用 Western blotting 方法检测各组细胞 Bax 及 PARP 的表达水平。 2.6 MG132 与紫杉醇对 K562 细胞周期的影响：用流式细胞术（FCM ）检测各组用 药对 K562 细胞周期的影响。 3 广州医学院 2007 级硕士论文 能量代谢调节对 MG132 和紫杉醇联合用药的影响 结果 1 MG132 和紫杉醇对肿瘤细胞活力的影响： 1.1 MG132 2.5μM ～10μM 作用 MCF-7 细胞 24h ，细胞相对活力值为 67.96% ～ 52.24% ，与对照组相比具有统计学差异（p 0.05 ）；MG132 1.25μM 以下浓度对 MCF-7 细胞没有明显抑制效应 。 1.2 D-G 及 L-G 培养条件下，紫杉醇 对 MCF-7 及 K562 细胞抑制作用随剂量的增加 而增强。紫杉醇 5μM 、10μM 作用 MCF-7 细胞 36h，在D-G 培养条件下，对应细胞 活力分别为 49.05% 、49.09% ，L-G 条件 5μM 、10μM 对应细胞活力分别为 47.57% 、 35.09%，与对照组相比具有统计学意义（p 0.05 ）；D-G 条件下 1μM 、5μM 、10μM 的 紫杉醇作用 K562 细胞 24h 对应的细胞相对活力分别为 77.10%、63.35%、54.61%， 与对照组相比具有统计学意义（p 0.05 ）；L-G 条件下 5μM 、10μM 紫杉醇对应细胞 相对活力分别为 59.06%、50%，与对照组相比具有统计学意义（p 0.05 ）。 1.3 在 MCF-7 细胞中 D-G 及 L-G 条件下联合用药组与单独用药组相比均没有统计学 差异，而在 K562 细胞中 D-G 条件下 MG132 1 μM 与 1 μM 、5 μM 、10 μM 紫杉醇 联合应用的细胞活力值分别为 50.97%、29.63% 、15.41%，与单独用药组比较，统计 学差异显著（p 0.05 ）。 2 MG132 和紫杉醇对 K562 细胞死亡的影响： 2.1 流式细胞