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与基因工程的关系: 蛋白质工程是在基因工程的基础上,延伸出来的第二代基因工程。 蛋白质工程流程图: 蛋白质 三维结构 氨基酸序列 多肽链 基因 DNA 预期功能 DNA合成 分子设计 mRNA 生物功能 转录 翻译 折叠 从预期的蛋白质功能出发 设计预期的蛋白质结构 推测应有的氨基酸序列 找到相应的脱氧核苷酸序列 蛋白质工程的主要步骤通常包括: (1)从生物体中分离纯化目的蛋白; (2)测定其氨基酸序列; (3)借助核磁共振和X射线晶体衍射等手段,尽可能 地了解蛋白质的二维重组和三维晶体结构; (4)设计各种处理条件,了解蛋白质的结构变化,包括折叠与去折叠等对其活性与功能的影响; (5)设计编码该蛋白的基因改造方案,如定点突变; (6)分离、纯化新蛋白,功能检测后投入实际使用。 某多肽链的一段氨基酸序列是: ……丙氨酸-色氨酸-赖氨酸-甲硫氨酸-苯丙氨酸…… 丙氨酸:GCU、GCC、GCA、GCG 色氨酸:UGG 赖氨酸:AAA、AAG 甲硫氨酸:AUG 苯丙氨酸:UUU、UUC 讨论: 1、怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列? 请把相应的碱基序列写出来。 2、确定目的基因的碱基序列后,怎样才能合成或改 造目的基因(DNA)? 讨论 蛋白质工程目前的现状:成功的例子不多,主要是因为蛋白质发挥其功能需要依赖于正确的空间结构,而科学家目前对大多数蛋白质的空间结构了解很少。 三、蛋白质工程的进展与前景 诱人前景: 用蛋白质工程制成电子元件: 优点:体积小、耗电少和效率高 人有了知识,就会具备各种分析能力, 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书,广泛阅读, 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍,我们能丰富知识, 培养逻辑思维能力; 通过阅读文学作品,我们能提高文学鉴赏水平, 培养文学情趣; 通过阅读报刊,我们能增长见识,扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操, 给我们巨大的精神力量, 鼓舞我们前进。 * 人体细胞 质粒 大肠杆菌 目的基因 (人胰岛素基因) 用同一种限制酶 进行酶切 DNA连接酶连接目的基因和质粒 重组质粒(重组DNA) 重组质粒导入大肠杆菌细胞 繁殖 人胰岛素 复制目的基因 获取目的基因 从基因文库中获取目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 植物、动物、微生物 目的基因的检测与鉴定 检测:分子水平是否插入、转录、翻译 鉴定:个体水平 小节: 基因工程的基本操作程序 基因工程的基本工具? 限制酶的特点? DNA连接酶和载体的种类? 基因工程的基本操作程序? 获取目的基因的方法? 基因工程的核心步骤是? 基因表达载体的组成? 将目的基因导入植物、动物、微生物细胞的方法? 目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键? 目的基因的检测与鉴定的方法? 复习 一、植物基因工程硕果累累 转基因工程技术主要用于提高农作物的抗逆能力,以及改良农作物的品质和利用植物生产药物等方面。 (一)抗虫转基因植物 杀虫基因: Bt毒蛋白基因 蛋白酶抑制剂基因 淀粉酶抑制剂基因 植物凝集素基因 Bt毒蛋白基因 蛋白酶抑制剂基因 淀粉酶抑制剂基因 植物凝集素基因 产生的抑制剂可与害虫消化道的蛋白酶结合 淀粉酶抑制剂抑制昆虫消化道中的淀粉酶活性 合成的糖蛋白可与昆虫肠道粘膜上的某种物质结合 编码的蛋白质在害虫肠道降解成有毒的多肽 转基因抗虫棉 (二)抗病转基因植物 病原微生物: 主要有病毒、真菌和细菌等。 抗病转基因植物采用的基因: 抗真菌转基因植物采用的基因: 病毒外壳蛋白基因(CP基因) 病毒复制酶基因 几丁质酶基因 抗毒素合成基因 (三)抗逆转基因植物 可以调节细胞渗透压的基因 抗冻蛋白基因 抗除草剂基因 (四)利用转基因改良植物的品质 将必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因导入植物;改变这些氨基酸合成途径中某种关键酶的活性。 例如:将富含赖氨酸的蛋白质编码基因导入玉米,赖氨酸含量提高30%。 将控制番茄果实成熟的基因导入番茄,获得转基因延熟番茄; 将植物花青素代谢有关的基因导入花卉植物矮牵牛中,出现颜色变异。 二、动物基因工程前景广阔 1.用于提高动物生长速度 2.用于改善畜产品的品质 外源生长素基因 将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组 普通鼠和生长速度加快的转基因鼠(右) 3.用转基因的动物生产药物 乳腺生物反应器 乳房生物反应器 将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起。 获取目的基因(例如血清蛋白基因) 构建基因表达载体 (在血清白蛋白基因前加特异表达的启动子) 显微注射导入哺乳动物受精卵中 形成胚胎 将胚胎送入母体动物 发育成转
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