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赖氨酰氧化酶基因原核表达克隆的构建
31 4 2009 8 Journal of Ningxia Medical University ·421 · :1674-6309(2009)04-0421-02 ·· 1 2 3 1 摆 茹, 杨 伟 , 赵建宁, 韩 梅 (1., 750004; 2., 750021; 3., 750004) :目的 (hLOX), , hLOX 。方法 RNA, RT-PCR LOX (750bp), pET28a, DH5α。pET28a-hLOX 。结果 pET28a hLOX 。结 论 LOX 。 :;RT-PCR; :Q785 :A (Lysyl oxidas , LOX) zol RNA。 RNA λ=260 nm λ= , 280 nm RNA , 1OD260=40μg RNA , RNA 。 cDNA , cDNA 。 , 、、 1.4 PCR hLOX G n Bank [1-2]。32KD hLOX (G n Bank NM_002317)pET28a , , EcoRⅠHind Ⅲ , , hLOX、 hLOX 。:: 。 5-CG GAATTC ATG GAC GAC CCT TAC AAC CCC T-3 1 EcoRI ;:5-GCGC AAGCTT CTA 1.1 、 ATA CGG TGA AAT TGT GC-3Hind III pET-28a, E.coil DH5ê, 。1st strand cDNA 。DMEM Gibco , , 750 bp。(GAPDH) , Difco RNA 。1% 。TRIZOL Gibco ,TaKaRa On St p RNA , 750bp PCRKit (AMV)、EcoRI、Hind III 、、 , PCR 。 、DNA mark r TaKaRa 。 1.5 1.2 10%/ hLOX pET28a EcoRⅠHind Ⅲ4 (100U/mL)/(100U/mL)DMEM , h, 。 , 37℃、5%CO 。 T DNA ligas E.coil DH5α。 2 4 , RNA 。 PCR, , 。 1.3 RNA cDNA Tri- 。DNA star G n Bank hLOX (G n Bank NM_ :2009-04-09 002317), 、 :, :NZ0772; 。pET28a-hLOX。 (2005) 2 : (1979- ), , ,, , 2.1 hLOX RT-PCR 。 RT-PCR 750bp, :, , 。 E-mail: 500 bp, 1。 hanm i0708 @ ·422 · 31 R
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