窖泥微生物群落SSCP分析条件优化的研究.PDFVIP

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2017-07-04 发布于江苏
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窖泥微生物群落SSCP分析条件优化的研究

第 23卷第 6期四川理工学院学报(自然科学版) Vol23 No6 2010年 12月 Journal ofSichuanUniversity ofScience Engineering(Natural Science Edition) ec2010 :2010) SSCP 1, 2 1, 2 1 卫春会 , 黄治国 , 甄攀 ( 1. , 643000; 2. , 643000) : 由于窖泥微生物群落结构复杂, 而 PCR- SSCP是研究环境微生物群落较理想的一种方法试验对影响 SSCP图谱的条件进行优化分析, 为窖泥微生物群落结构解析提供了有效的手段结果表明:变性缓冲液配比为: 去离子甲酰胺 19mL溴酚蓝 3mg5 TBE 250L05M E TA 5L10% S S 5L; 凝胶条件为: 凝胶浓度为 12%丙烯酰胺与N, N- 亚甲基双丙烯酰胺的比例为 291无甘油经 95 变性 10m in, 4 条件下 200V 电泳 8h,可得到较理想的图谱 : 窖泥; PCR- SSCP; 16S r NA;微生物群落 : TS2623; Q9333 : A 引言 1 材料与方法 , 11 , , , , - 20 , 12 , , ; Taq NA poly TM merasedNTPsTaKaRa Taq R100AM L500TM NA ( polymerase M arker; E. Z. N. A. TM chain reaction - single strand conformation polymorphism, soil NA kit Omega PCR- SSCP ) PCR 13 DNA , SSCP, 05g, E. Z. N. A. TM soil NA kit [ 1] NA , NA 14 PCR , 16S r NA PCR P11P(5- GAGGA , , AGGTG GGGAT GACGT - 3) P13P ( 5- AGGCC PCR- SSCP, CGGGA ACGTA TTCAC- 3), 217bp [ 2] [ 4] , SSCP PCR 50L, : 10L Taq , (5U/L), 50L 10 buffer, 30L M gC12(25mmol/L), SSCP, 20L dNTPsM ixture( 25mmol/L), ( 10mol/L) 15L, 50L NA ( 100ng/L), 310L