3株致病性鸡大肠杆菌P型菌毛结构基因的克隆、序列测定及同源性分析.pdfVIP

维普资讯 ，n 中 国兽 医 学 报 2005年5月 第 25卷 第3期 ChinJVetSciMay2005 Vol·25 No·3 3株致病性鸡大肠杆菌 P型菌毛结构基 因的克隆、序列测定及 同源性分析 苗玉和 ，王文成 ，张贵刚 (辽宁省益康生物制品厂。辽宁辽阳111000) 摘要：用鸡致病性 大肠杆菌分 离株 O 、O 和 O s的基 因组DNA做 为模板，PCR分别扩增 出了0．55kb的P型茵毛结 构基 因(papA)。将扩增得 到的3个 papa基 因片段分别克隆进 pGEM—T 栽体 中，转化至受体茵 JM 109中，用Amp／ IPTG／X—ga1琼脂平板蓝 白茵落筛选法，得到含阳性 重组子的菌株 ，提取质粒后 用BamH I和 SalI双酶切进行鉴定。 所得 阳性重组子进行DNA序 列测定，测序结果经 DNAStar核酸分析软件 包分析 比较 ，结果表 明，所构建的克隆质粒 中均含有相应 完整 papA基因，其开放式阅读框架大小为 549bp，编码 182个氨基酸。此 3株茵的P型茵毛结构基 因 的同源性为 98．9 ～1O0 ，其 中0 株和 0 株的P型茵毛基因的ORF序 列 100 相 同，()z株有 2个碱基 与前 两者 不 同。 关键词 ：鸡致病性大肠杆菌 ；P型茵毛；TA克隆；测序；同源性 中圈分类号 ：$852．61；Q78 文献标识码 ：A 文章编号：1005—4545(2005)03—0250—03 鸡大肠杆菌病 (chickencolibacillosis)是 由大肠埃希 氏菌 的某些致病性菌株引起 的一类疾病 的总称。随着我 国养鸡业 1 材料与方法 集约化程度的不断提高，特别是 2O世纪 8O年代 以来 ，鸡大肠 1．1 菌株和质粒 鸡致病性大肠杆菌分离株 ()、()、()和 杆菌病在各地的流行趋于严重，在受不利 的环境因素和其他 受体菌 JM109，由本厂保存 ；质粒 pGEM—T，购 自Promega公 传染 因子应激的鸡群中，大肠杆菌感染居于首位 ，一般发病率 司 。 为 10 ～69％，死亡率为 3．8 ～72 ，致死率为 4O．2 ～ 1．2 试剂 限制性核酸内切酶 BamH I和SalI、T 噬菌体 9O．3 。由本病导致 的鸡只死亡 、生产能力下降等所造成的直 DNA连接酶 、IPTG、X—gal、PCRPrepsDNAPurificationSys— 接经济损失 巨大Ⅲ 。 tem，购 自Promega公 司 ；溶菌酶 ，购 自Sigma公 司；RNaseA 近年来国内外学者 的研究表明，菌毛是禽大肠杆菌的重 购 自 Calbiochem 公 司；氨 苄 青 霉 素，购 自 Boehringer 要致病 因子，绝大多数致病性血清型菌株都含有菌毛。鸡大肠 Mannheim 公司 。 杆菌具有 I型和 P型 2种菌毛 ]。研究P型菌毛基因，对揭 1．3 P型菌毛结构基 因(papA)的 PCR扩增 根据文献 [4] 示鸡大肠杆菌致病机理、诊断及有效的控制鸡 大肠杆菌病有