菌种保藏冷冻干燥管制备.pdfVIP

河北科技大学生物科学与工程学院 河北省发酵工程技术研究中心 徐亲民  水分在冰冻状态下直接升华而干燥  冷冻干燥的三要素：  真空——降低水的蒸汽压以加速水分的蒸发  冷冻——使水蒸气冷凝以减轻真空泵负荷,加速干燥  温度——达到进一步加速干燥的目的  冷冻干燥的优点： 对微生物的生物活性影响小  所得干粉疏松，溶解性好  水分含量低  由于同时满足干燥和真空两个菌保要素,因而保存时 间长,保存过程不易失活和退化 2  取质地均匀、厚实(壁厚1 mm)、无毛点、无气泡 的硬质玻璃专用菌种冷冻管（图1），清洗干净后 在管内放置打印有菌种简略名称和编号的纸条标 签（图1左边的单管式冷冻管置于熔封区和装液区 之间，右边的套管式冷冻管置于内外管之间）， 单管式冷冻管管口和套管式冷冻管内管管口插入 缠绕松弛的棉签，用牛皮纸包裹，于121℃灭菌30 分钟，取出置37℃孵育24 小时，重复灭菌一次， 105~110℃烤干（有硅胶指示剂的要使硅胶达到深 蓝色），置干燥器内备用。 3 棉塞棉塞 外管 熔封区 熔封区 棉塞 内管 放标签处 放标签处 变色硅胶 装液区 推荐尺寸：(左) Φ8 ×100，璧厚1 mm，球径12 mm；( 中、 右)外管Φ12×100，璧厚0.8-1 mm ；内管Φ9 ×50，壁厚0.5 mm 。 4  取市售新鲜、清洁、无抗生素污染的牛奶200 g ， 在5000 r/min下离心10分钟，除去上层奶皮，如此 重复两次。然后分装入两个250 ml锥形瓶中，加 棉塞并用牛皮纸包头、扎牢，在110℃下灭菌15分 钟，冷却后备用。如灭菌后放置时间超过24 小 时，则应弃用。也可以购买袋装或盒装的超高温 灭菌优质脱脂牛奶直接使用，无需再灭菌。或将 脱脂奶粉制成还原乳，同上灭菌后使用。 5  选生长饱满且无菌检查合格的新鲜菌种斜面或米 孢子，加入适量灭菌脱脂牛奶(一般每支中试管斜 面加10 ml脱脂牛奶，或每10 ml脱脂牛奶中加1 g 米孢子粒) ，用自制接种耳( 图2)将斜面上的菌苔轻 轻刮下( 注意不要刮坏琼脂表面) ，或在强力振荡 器上将米孢子粒上的孢子震落，摇匀，用灭菌吸 管或长针注射器吸出牛奶菌悬液，置于预先灭菌 的空试管内。以上操作应在无菌室内的超净工作 台上进行。 6 不锈钢丝