ADPATP发光检测试剂盒.PDFVIP

威格拉斯生物技术（北京）有限公司 ADP/ATP发光检测试剂盒 (ADP/ATP-Lite Assay Kit) 产品说明： ATP参与多种酶促反应，维持正常的生命活动。多种激酶和ATP酶可将ATP转化成 ADP 。通过ATP和ADP 的检测，可以观察这些酶促反应的进程。同时，ADP和ATP 含量的变化，也与细胞的活性状态有密切关系；正常细胞发生凋亡及坏死时，ADP 和ATP 的含量，均有特征性的改变。本试剂盒采用生物发光(bioluminescent)法，依 据荧光素酶(luciferase)催化底物荧光素的转化，高效利用ATP 的能量，发射出光子。 萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)催化的发光反应，与ATP浓度具有很好的线性依赖 -13 mol 。本试剂盒首先利用荧光素酶 关系和极高的敏感性，ATP 的检测灵敏度达到10 反应体系，测定样品中ATP 的发光值，然后用ADP转换酶将ADP转化成ATP ，再次 利用同样的发光体系，测定样品中ADP转化所得的发光值。获得的结果可提供样品 中ADP和ATP 的相对含量及变化，从而了解酶促反应的进程或细胞状态的改变。 产品内容与储存方法： 名称 数量 保存条件 100x Lysis Buffer (细胞裂解液) 1 ml -20℃ ADP/ATP Assay Buffer (反应缓冲液) 10 ml -20℃ Luciferin 0.5 ml -20℃ Firefly luciferase 1 ml -20℃ ATP Converting Enzyme 1 ml -20℃ 可作200次以上ADP/ATP检测。低温运输，-20℃或-80℃避光保存。有效期6个月。 所需其它试剂： 使用者需准备PBS 、双蒸水等。 操作方法： 样品准备： 对体外酶促反应样品，一般可直接用双蒸水稀释后进行检测。样品中ATP含量应稀释 到0.1 mM一下，以保证在测定的线性范围内。 对于培养细胞，按下列方法进行： 1) 配制裂解液：临用前，取适量100x Lysis Buffer ，用双蒸水稀释至1xLB，混匀。1xLB 可长期冻存于-20℃。 2) 细胞清洗收集：倾去培养板/皿中的培养液，加入足量PBS，轻轻洗涤细胞。完全 倾去洗涤液，胰酶消化后计数。如为悬浮细胞或部分悬浮细胞，应离心收集计数 。细胞重悬于少量PBS 中。 3) 细胞裂解：将一定数量的细胞悬液（如5000~50000个细胞）移入1.5 ml离心管，加 入200~500 μl裂解液在涡旋振荡器上充分混悬震荡30秒，注意保持各样品的细胞浓 度基本一致。裂解细胞可直接用于发光测定，也可离心30秒，取上清做发光测定 电话：（010 （010 传真：（010 网址： 电子邮件：runon@ 威格拉斯生物技术（北京）有限公司 。裂解细胞含量较多时，可将样品用双蒸水稀释，以保证在测定ATP 的线性范围 内。 配制发光反应液： 测定前，在室温待ADP/ATP Assay Buffer和Luciferin溶化，混匀（注意避光）。按20/1 比例用ATP