植物组织培养学(有偷募片).ppt

《植物组织培养学》实验;实验一 植物组织培养实验室参观;二、仪器用具 组培室内的各种实验设备。 三、实验内容 1．介绍合理的组培室布局 2．介绍实验设备和用具 3．介绍实验的操作规程。 四、作业 将本此实训内容整理成实验报告。 每人设计一个植物组织培养室的组建方案。（说明设计思路）;;;;;实验二 MS培养基母液的配制与保存;二、材料与用具 1 所需仪器及设备：天平、烧杯、定容瓶、量筒、蒸馏水、母液瓶、标签、冰箱等。 2 所需药品及试剂：配制MS培养基所需的药品、生长调节物质、蒸馏水、95%酒精、0.1mol/l的NaOH、0.1mol/l的HCl;三、方法步骤 1．母液的配制 根据MS培养基配方表配制六种母液。（详见附表） 2．母液的保存 （1）装瓶：将配制好的母液分别倒入瓶中，瓶上贴好标签，注明培养基名称、母液号、吸取量与配制日期。 （2）储藏：将母液瓶储放在冰箱内备用。 四、作业 1．整理实验报告。 2．列一张配制MS培养基母液成分表。;配制MS培养基母液成分表;实验三 MS固体培养基的配制;二 材料与用具;三 方法步骤;四、作业;实验四 愈伤组织的诱导 ;;;二 材料与用具;三、方法步骤;5．用蘸有70%的酒精的纱布擦拭装有培养基的培养瓶，放进工作台。 6．把接种器械浸泡在95%酒精中，在火焰上灭菌后，放在器械架上。 7．胡萝卜种子经75%乙醇浸泡30s，无菌水冲洗2遍，再用0.1%升汞浸泡10分钟，无菌水冲洗3-5次后，接种于不含任何激素的1/2MS固体培养基含（1.5%蔗糖）上，于24℃暗培养条件下萌发7-10天后，将子叶和下胚轴切成0.5cm的截段作为组织培养的材料。 8.进行接种。 9.接种完毕后,清理和关闭超净工作台,并将培养瓶放入培养室培养。;四、作业;实验五 月季茎段的离体培养;;;二 材料与用具;三、方法步骤;5 外植体消毒灭菌时，先用自来水冲洗2小时，洗去渗出汁液，再用70%的酒精消毒8-9秒后用0. 1%的升汞消毒7-8分钟，无菌水冲洗4-5次，效果较好.接种时，用干净滤纸吸干外植体表面水分，可以明显减少污染率和褐变率 6 接种完毕后,清理和关闭超净工作台,并将培养瓶放入培养室培养。;四、作业;实验六 花药培养 ;;二、材料与用具 ;三、方法步骤;2.材料的选择（即花粉发育时期的鉴定） 选择花粉处于单核靠边起的花药培养 鉴定方法：从田间采集花蕾数个，从每花蕾取花药1-2枚置载玻片上，加醋酸洋红1-2滴，用玻棒头或镊子的一头压碎花药，剔除碎片，加盖玻片镜鉴。通过镜鉴记录处于单核靠边期花药花蕾的外观形态，便于下次采集。通常花药单核靠边期的草莓花蕾形态是：未开放，花萼略长于花冠或花冠刚露白，花冠白色或淡绿且不松动，花药微黄且充实。;3.材料预处理、消毒和接种;4.培养观察 接种后暗培养7天，再转入光照培养。组培室内温度控制在20℃左右，光照时间16h/d，光强1500-2000lx。;四 分析讨论 1 观察并记录花药的分化状况 2 30天后，分析培养基对于花药培养的影响;实验七 植物顶端分生组织培养脱毒;二、材料与用具 ;三、方法步骤;2．打开超净工作台内的吹风和紫外灯，并打开无菌操作室内的紫外灯，照射20分钟（进行紫外灭菌） 3．进行外植体预处理（即对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，将准备使用的植物材料在流水中冲洗干净。） 4．照射20分钟后，关闭紫外灯，打开照明灯，用70%的酒精擦拭工作台和双手，准备进行外植体的消毒和接种工作。;5 将草莓茎尖置于显微镜下，用镊子夹住茎段的后半部分，???用解刨针除去叶片及叶片原基，直至露出闪亮圆锥体，即为顶端分生组织。 6 用消毒完毕的解剖刀，切下顶端分生组织，并迅速将其转接到培养基上。 7 接种后暗培养7天，再转入光照培养。;四 分析讨论