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人Ⅰ型精氨酸酶基因的克隆及表达
硕士论文 人I型待氨酸酶基因的克隆及表达 摘 要 精氨酸酶是尿素循环中的一种酶，催化精氨酸水解产生鸟氨酸和尿素，在机体氮 代谢方面起了重要作用。精氨酸作为一种半必需氨基酸，仅为快速增长的组织，尤其 是肿瘤组织所必需。而精氨酸酶通过分解精氨酸对肿瘤细胞进行营养剥夺，对正常组 织影响较小，因此是一种良好的抗肿瘤药物。 以人肝总RNA为模板，用逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增得到人I型精氮 酸酶基因(ha 99．7％． 将hAI重组到毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K，构建重组质粒pPIOJK—haI，转化 诱导后，用酶活检测和SDS的方式鉴定hAI的表达．甲醇诱导至120h为止，上清 中始终未检测到外源蛋白的表达；菌体内酶活在诱导72h后达最大，为每克湿菌体 0．372U。 I，转化至大 将hAI重组到大肠杆菌表达载体pET30a，构建重组质粒pET30a．-hA IPTG I)．经lmM 肠杆菌宿主菌BL21(DE3)，得到基因工程菌BL21(DE3)(pET30a—ha 分析表明，诱导后的BL21(DE3)(pET30a-hAI)在约35kD处有明显的蛋白表达，与 理论值相符． 关键词：人I型精氨酸酶克隆大肠杆菌毕赤酵母表达 硕士论文 人I型精氨酸酶基因的克隆及表达 Abstract converts tOornithineand akind inurea Arginase,whicharginine urea,isofenzyme a roleinNmechabolism．Asa amino acid, cycle．Itplayssignificant semi-necessary is for forthetumortissue．So arginineonlynecessaryfast-growntissue,especially arginase can muchmore seine勰an does anticarcinogenicagentbydeprivingofarginine,which harmtocancercell tonormal istocloneand than tissue．The ofthis objectivepaper human I molecular arginase O认I)with cloningtechnique． express gene ThehA1 wag fromhumanliverRNA aroutine RT-PCR,followed a
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