《医学分子生物学（第2版）》教案 基因治疗.docVIP

医学分子生物学---基 因 治 疗教案 《医学分子生物学》第2版 主编：药立波 目的与要求： 掌握 基因治疗的概念；基因治疗的主要策略和反义RNA技术 了解 基因治疗的一般程序；基因治疗中基因导入的方法及其存在问题 教学内容与时间安排、教学方法： 第一节：基因治疗的策略和基本程序 40分钟 第二节：基因转移技术 40分钟 第三节：反义RNA在基因治疗中的应用 40分钟 第四节：基因治疗的主要策略及其问题 40分钟 教学方法：：CAI, 大量图片简图加深感性认识，动画帮助理解。 教学重点及如何突出重点、难点及如何突破难点： 重点：1、掌握基因治疗的概念；基因治疗的主要策略。 2、基因转移的生物学方法中的常用载体；基因转移中常用的靶细胞。 难点： 基因治疗的一般程序；基因治疗中基因导入的方法。 解决办法：结合举例和动画演示加深理解 第一节 概述 介绍传统治疗方法治疗遗传病的缺陷，引出基因治疗的概念.（10分钟） 1990年9月14日，一位因患遗传性腺苷脱氨酶（adenosine deaminase，ADA）缺乏症，第一个接受基因治疗并获成功。 接着引出基因治疗的策略和基本程序。每一种策略都要举例说明，结合临床病例，让学生更容易理解。 （30分钟） 一、基因治疗的概念和条件 基因治疗是以基因转移技术为基础的，它的开展需要以下技术作为前提： （1）必须选择基因治疗的对象，即要确切了解要行治疗的疾病发生的分子机制和缺陷基因，并能对患者作出正确的诊断。 （2）能在体外获得正常有功能的基因或遗传物质。 （3）具有较方便的手段将有正常功能的外源基因或遗传物质送到患者体内。 （4）进入患者体内的外源基因或遗传物质能比较长期稳定地表达，发挥功能，从而产生疗效。 二、基因治疗的策略 基因治疗的方案分为以下四类 : 1．基因置换（gene replacement）或基因矫正（gene correction）疗法 2．基因增补（gene augmentation） 3．基因干预（gene interference） 三、基因治疗的基本程序 1．治疗性基因选择和获取 2．基因载体的选择 目前使用的有病毒载体和非病毒载体。 第一节课完--------------------- 3．靶细胞的选择 通过图片讲解各种细胞的优缺点。（15分钟） 1．? 造血细胞 造血细胞在体内种类多且在体内多处分布，多种疾病与造血细胞有关，已建立了骨髓移植方法，因此造血细胞作为基因转移的受体细胞研究较多，其中骨髓最受重视。骨髓中的造血细干胞能分化成各系血细胞，具有移植方便、繁殖能力强等特点，其不足之处是尚需进一步提高基因转移效率，提高在体内的表达水平和延长表达时间。 2．? 淋巴细胞 淋巴细胞主要以T淋巴细胞为主。最受学者关注的是IL-2激活的肿瘤侵润淋巴细胞（TIL细胞），这是人类基因治疗所选用的第一种受体细胞。 以淋巴细胞作为靶细胞的优点是：在提取、体外培养、回输体内、基因转移效率和体内高效表达等方面均不存在什么问题，唯一的缺点是回输体内后的寿命不长，需要经常输入，这为推广应用带来一定的困难。 3．? 皮肤成纤维细胞 4? .肝细胞 5．? 肌肉细胞 6．? 血管内皮细胞 7．? 肿瘤细胞 8．? 其它细胞 第二节? 基因转移技术 通过图表等说明各种方法的优缺点以及现在的临床应用。（25分钟） 一、生物学方法 主要是利用载有外源基因的缺陷病毒感染受体细胞，这是广泛用于临床的较高效、方便的转基因方法。 1．逆转录病毒载体 2．腺病毒载体 3．腺相关病毒载体 4．单纯疱疹病毒载体 二、非生物学方法 1． 显微注射法 2． 磷酸钙共沉淀法 3．? 微粒轰击法（Partical bombardment） 4．? 脂质体（liposome ） 5． 受体介导的基因转移技术 第二节课完--------------------- 第三节 反义RNA在基因治疗中的应用 通过介绍最早的基因治疗历史引出反义RNA.（10分钟） 并指出我国的国情： 我国在1992年，复旦大学遗传所和上海长河医院、二医大合作，治疗?型血友病（IX缺陷），将正常基因转入皮肤成纤维细胞，回输给病人，获得成功，但效率不太高。 （一）概况 即根据碱基互补原理，将人工合成或生物合成的特定的DNA或RNA序列，导入靶细胞，形成m