第二章 仪器分析—高效液相色谱法.pptVIP

* 流动相的制备 供试品和对照品溶液配制（各两份） 系统适用性试验 操作前的准备 * 理论塔板数（n）： 分离度（R）： 系统适用性实验： 重复性 对照溶液连续进样5次 相对标准偏差应不大于2.0% * 拖尾因子（T）： w0.05h为0.05峰高处的峰宽； 为峰极大至峰前沿之间的距离。 除另有规定外，T应在0.95～1.05之间 实例：高效液相色谱外标法测定头孢拉定含量 取含头孢拉定为94.1%和头孢氨苄为2.3%的对照品35.35mg溶解定容为50ml，取10μl注入高效液相色谱仪，测得头孢拉定峰面积头孢氨苄峰面积为354934；另称取头孢拉定供试品35.88mg，溶解定容为50ml，取10μl注入高效液相色谱仪，测得头孢拉定峰面积头孢氨苄峰面积为472368；按供试品的总量分别计算头孢拉定和头孢氨苄的百分含量。 内标液 取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液 对照液 精密称取VitE对照品0.2011g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 1~3ul注入GC仪，测定，计算 供试液 精密称取供试品0.1998g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul 注入GC仪，测定，计算 维生素E含量测定 对照液 供试液 按《中国药典》2015版（二部）的规定测定维生素E，做系统适用性实验时的数据如上表。 取维生素E对照品20.80mg(98.0%)，精密加入浓度为1.044mg/ml的内标物（正三十二烷）溶液10.00ml溶解，取1μl 注入气相色谱仪，对照品峰面积为481736，内标物峰面积为238787，求维生素E的理论塔板数、维生素E与内标物的分离度和校正因子各为多少？再精密称取维生素E供试品22.68mg，内标物28.00mg，用气相色谱法测得供试品峰面积为529887，内标物峰面积为644911，计算供试品中维生素E的含量。 物质 Rt/min W(1/2h)/min W/min 对照品 8.88 0.25 0.6 内标物 5.74 0.6 1.2 实例 * * 第二章仪器分析—高效液相色谱法 HPLC * * 凝胶柱上加上中药提取物 * 洗脱的效果 * HPLC基本组成示意图 HPLC主要由色谱柱、加压泵和检测器组成 * 色谱柱 色谱柱是液相分离的核心部件 * 输液泵 输液泵分单元等度泵和多元梯度泵 * 检测器 对没有紫外吸收的物质的检测，以蒸发光散射检测器用得较多 检测器种类很多，现在最常用的是紫外检测器 * 进样器— 手动进样器 Rheodyne 7725i 几乎成了所有液相色谱仪的进样器 * 进样器— 手动进样器—六通阀 * 进样器 自动进样器可由软件完全控制 Waters 717 Agilent * 色谱工作站 色谱工作站就是HPLC的控制系统 外企的在数万元左右，国产的几千元。 * 色谱工作站 工作站的两大功能 1.控制仪器 2.处理数据 * 液相色谱仪器常见种类 high performance liquid chromatograph * 液相色谱仪（2） * 液相色谱仪（3） 安捷伦Agilent 1100 * 液相色谱仪（4） * 液相色谱仪（5） 上海伍丰科学仪器有限公司 * 液相色谱仪（6） 戴安公司Ultimate 3000 * 高效液相色谱法的特点 特点：高压、高效、高速 现代药物分析最有用的工具和方法 * 高效液相色谱法在药典中的使用 　 1985年版 1990年版 1995年版 2000年版 2005年版 数量 8 56 121 279 1327 比例% 0.5 3.2 5.1 10.4 41.3 * 高效液相图谱 各成分依次流出色谱柱，从进样到出峰的时间称为保留时间 * 定性方法 定性: 确定成分归属，依据与对照品相比较时，相同的保留时间 * 定量方法 外标法 内标法 归一法 * 定量方法——外标法 内标法 对照溶液：精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。 供试品溶液：再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图。 * 定量方法——内标法 对照品 供试品 内标物 * 定量方法——归一法 * （1）吸附色谱法 （2）正相色谱法 （3）反相色谱法 ①一般反相色谱法 ②反相离子对色谱 ③反相离子抑制色谱 主要分离方法 流动相的选择 在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要