乳苣水提取物体外诱导肺癌细胞h1299和a549凋 - 上海师范大学学报.doc

乳苣水提取物对人肺癌细胞SPCA-1生长的影响 蒋佳君, 韩雨珊,刘小敏,张彩艳,贺燕云* (上海大学生命科学学院实验教学中心，上海 200444 ) 摘要：为了探讨乳苣水提取物对体外培养的肺癌细胞SPCA-1的影响，本研究用不同浓度的乳苣水提取物分别作用于SPCA-1细胞，从细胞增殖活力（CCK-8法）和细胞凋亡（AnnexinⅤ-FITC/PI染色）mg/ml、1 mg/ml、1.25 mg/ml和1.5 mg/ml的乳苣水提取物处理SPCA-1细胞24h后，与对照组（未处理）相比，处理组细胞增殖活力均显著下降（P0.001）。流式细胞仪检测发现随着处理浓度的增加，处理组细胞凋亡率都显著提高（P0.05），且呈剂量依赖关系。为了探索乳苣是否对体内肿瘤有抑制作用，构建了SPCA-1细胞的裸鼠皮下瘤模型，通过喂食乳苣水提物观察皮下瘤的生长情况，实验结果表明，与未喂食乳苣的对照鼠相比，喂药5周的实验组的瘤体得到明显的抑制。实验表明乳苣水提取物能够抑制体外和体内生长的SPCA-1细胞，因此乳苣可以作为一种潜在的预防和治疗肺癌的药物来做进一步的研究。 关键词：乳苣水提取物; 肺癌细胞; 增殖; 凋亡; 抗肿瘤作用 中文分类号: Q28 文献标识码: 文章编号: 据世界卫生组织（WHO）统计，全世界每年有1000万新发癌症患者，600万人死于癌症，癌症几乎是死亡的代名词，目前，治疗癌症的措施有手术、化疗、放疗和免疫治疗等方法，但其治疗效果都不理想。由于中药的毒副作用低，能提高机体的免疫力，所以越来越多的中晚期癌症患者选择中药治疗，许多报道也证明了中药在抗肿瘤复发、转移中的优势。因此寻找能预防癌症并能长期服用的高效无毒的中草药成为迫切的问题。 药食两用植物乳苣（） 1.1.1细胞株 人肺癌细胞株SPCA-1细胞；购自中国科学院上海细胞生物学研究院。 1.1.2 主要试剂 乳苣（Mulgedium tataricum (Linn.) DC.）为菊科乳苣属植物，采于晋西北农田，由上海大学生命学院王伟博士鉴定。DMEM培养基（CORNING)；胎牛血清（Hyclone)；胰蛋白酶（Hyclone）；Penicillin-Streptomycin Solution(Hyclone)；CCK-8试剂盒（上海七海复泰生物公司）；Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒（上海七海复泰生物公司）。 1.1.3 主要仪器 流式细胞仪为Moflow XDP；CO2培养箱；酶标仪为美国BioRad产品；倒置显微镜为LEICA 公司产品；冷冻干燥机为美国LABCONCO公司产品。 1.2 实验方法 1.2.1 乳苣水提取物制备 采全草，阴干，-80 ℃保存。将8 g的干乳苣，粉碎，浸泡到100 ml沸水中，超声1 h，沸水浴30 min，过滤两次，分装原液经48 h冷冻干燥后制成冻干粉，-80 ℃保存，备用。使用时，用培养基或水重新溶解冻干粉，0.22 μm滤膜过滤后使用。 1.2.2 细胞培养 以含10％新生牛血清、100 μg／ml青霉素、100 μg/ ml链霉素的DMEM培养基培养SPCA-1，37 ℃、5％CO2，恒温培养箱中常规消化传代。 1.2.3细胞增殖活力检测(CCK-8法) 将细胞均匀铺于96孔板中，待细胞贴壁生长至覆盖培养板底部h，检测前四小时先换无血清培养基培养，每孔加5 μl CCK-8试剂，避光温育1-2 h，用酶标仪测450 nm下的吸光值，每个剂量重复4次，实验重复3次。 1.2.4 Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡 不同浓度乳苣水提取物处理细胞24 h后收集到的细胞，200 μl loading buffer悬浮细胞，2.5 μl FITC染色，室温避光处理15 min，再用5 μl PI染色，冰浴避光处理5 min后上流式细胞仪检测，用Summit 5.2 获取数据并分析。 1.2.5裸鼠皮下瘤模型的建立和乳苣水提物喂食裸鼠 5周大的雌性裸鼠分为处理组和对照组，通过灌胃的方式对处理组裸鼠（体重约为14-15 g）每天每只喂食50 mg的乳苣提取物（水溶物），对照组喂食同等体积的溶剂水，对处理组裸鼠先进行3天的喂药处理，三天后，对SPCA-1细胞进行裸鼠皮下注射（每只注射1.5×106个SPCA-1细胞），然后连续喂食乳苣提取物5周，每周记录瘤体体积以及裸鼠的体重和进食量，当瘤体体积约为1-1.2 cm3时，杀鼠取瘤，对瘤体称重。 1.2.6 统计学处理 所得数据采用GraphPad Prism5软件进行统计学分析，以P0.05为差异具有统计学意义。 2