Olympus IX51倒置荧光显微镜操作规程 - 厦门大学医学院中心 .DOCVIP

倒置显微镜操作规程 Olympus IX5 厦门大学医学院中心实验室 黄静茹 2017年3月 说明： ①透射光主开关；②汞灯高压电源开关；③透射光光强控制钮；④滤色片架； ⑤光路选择杆；⑥X轴和Y轴调节钮；⑦物镜转盘；⑧粗/微调焦旋钮； ⑨双目观察筒；⑩屈光度调节环；?聚光镜高度调节钮；?聚光镜对中旋钮； ?视场光阑调节杆；?孔径光阑调节杆；?聚光镜转盘；?荧光光闸（SHUTTER）打开透射光源（白光）主开关①； 打开荧光光源（汞灯高压电源）②； 打开电脑，进入 cellSens Standard工作站； 备注：标本为HE染色、免疫组化时，不需要打开荧光光源；标本为荧光染料染色时，一般也不需要打开白光光源。 二、明场观察ield BF） 1、2、转动荧光激发块转盘到“6”的位置； 3、聚光镜转盘到“BF”位置，直到听到咔嗒声； 4、将光路选择杆⑤推进去（ 选择观察光路）； 5、转物镜转盘，选用合适的物镜，调节光强控制钮③至合适的强度， 调节粗/细调焦旋钮聚焦；相衬观察Phase contrast PH) 1、 2、荧光激发块转盘到“6”的位置； 3、转物镜转盘，选用合适的物镜； 4、转动聚光镜转盘，使相衬光学元件与所用物镜相匹配（见表1）； 5、将光路选择杆⑤推进去（ 选择观察光路）； 6、调节光强控制钮③直至合适的强度，调节粗/细调焦旋钮进行聚焦观察表1 10X、20X 40X 相差元件 PHL PH 1（PH C） PH 2荧光观察1、先用明场观察对标本定位，再转入荧光观察； 2、将光强调节钮③逆时针旋至最低，将孔径光阑向右拨 3、转荧光激发块转盘，根据所用的荧光染料选择匹配的荧光激发块 4、打开荧光光闸（SHUTTER），使其置于“”位置； 5、将光路选择杆⑤推进去（ 选择观察光路）； 6、转动物镜转盘，选用合适的物镜，调节粗/细调焦旋钮聚焦观察，根据荧光强度选择合适的ND滤镜（荧光减光阀）进入光路。（第一个荧光进入光路第二个ND6：6%的荧光强度进入光路，第三个ND25: 25%的荧光强度进入光路）五、CCD成像 1、cellSens Standard工作站中，点击右侧摄像控制中的实时观察 2、将光路选择杆⑤拉出（），调节粗/细调焦旋钮进行聚焦； 、曝光：可选择自动曝光，通过手动调节曝光时间使 图像更清晰； 背景校准：黑平 衡，在样品空白背景处画一个小区域，软件自动以该处为背景对整幅 图像进行，使； 点击拍照右键进行保存。 六、图像处理 1、标尺：在工具栏上选择正确的物镜倍数，点击“视图”---标尺，软件自动将 标尺加在图像上，再点击“图像”----印入信息，保存即可。 2、测量：点击“测量”----测量工具，软件左侧显示出测量工具栏，点击选择 所需的测量工具，在图像上画目标区域，右键点击结束测量即可显示结果。 测 量结果可导出Excel：点击测量工具栏图标 。 3、图像叠加：打开拟叠加的图，“图像”----组合彩色图像----“可用图像”中 选择拟叠加的图----√合并层----确认。 4、图像拼接：按一定顺序 拍摄图像，相邻两张图像的边缘要部分重叠， 所有图像拍摄完毕后，选择视图---工具---画廊---全选拟拼接的图像，选择 运算---图像拼接---设置水平方向图像数量---根据拍摄顺序摆好图像位置 ---确定；预览后视情况选择“裁剪边缘”---确定。 七、关机 1、关机前请查看放在实验台上的刷卡机“日历”，如紧接着有其他人员将使用该仪器，无需关机，联系后面使用者。 2、实验完毕，先退出工作站； 3、将透射光光强调节钮③逆时针旋至最低（TH4）①物镜转盘注意汞灯后必须至少使用0.5h才能关闭！汞灯后若还需使用，必须等0.5h后才能再次开启！ 软件上没有显示“摄像控制”，通过以下方式调出：视图---工具窗口---摄像控制。 在使用20和40物镜时，聚焦，先检查再转动物镜上的校正环，边聚焦，找到最佳位置。