猪流感病毒A／Swine／InnerMongolia／547／01分离株神经氨酸酶.PDFVIP

维普资讯 第27卷 第 1期 中 国 预 防 兽 医 学 报 V01．27．No．1 2005年 1月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Jan．2005 猪流感病毒 A／Swine／InnerMongolia／547／01分离株 神经氨酸酶基因的克隆及真核表达 赵 朴 ，一，李海燕 卜，杨焕 良，陈化兰 ，于康震 ，一，卢中华 (1．中国农业农业科学院 哈尔滨兽医研究所 农业部动物流感重点开放实验室 兽医生物技术国家重点开放实 验室，黑龙江 哈尔滨 150001；2．河南农业大学 牧医工程学院，河南 郑州 450002；3．全国畜牧兽医总站，北京 100026) 摘要：根据 GenBank中登录的猪流感病毒参照序列设计了扩增神经氨酸酶(NA)基因的特异性引物。从猪流感病毒 A／Swine／InnerMongolia／547／O1(H3N2)株感染的鸡胚液中直接提取病毒RNA，经RT-PCR扩增后将其克隆到pMD18一T载体 上 ，进行序列测定和拼接。用 HindⅢ酶切后 ，亚克隆到杆状病毒转移载体 pMelBacB上 ，得到重组转移载体 pMelBacNA，然 后与线性化杆状病毒 DNA(Bac—N—BhieTMDNA)共转染于Sf9昆虫细胞。经3轮噬斑纯化，提取其 DNA经PCR鉴定，获得重 组杆状病毒株。SDS结果显示，目的基因已获得表达，Westernblot和神经氨酸酶活性检测结果显示表达产物具有 良好的免疫原性和神经氨酸酶活性，为 SIV亚单位疫苗和 NA基因的深入研究奠定了基础。 关键词 ：猪流感病毒； 神经氨酸酶基因；克隆； 重组杆状病毒； 表达 中圈分类号：S852．659．5 文献标识码 ：A 文章编号：1008—0589(2005)01—0001—04 Cloningandexpressinginthebaculovirusexpressionsystem ofNA gene ofA／Swine／InnerMongofia／547／01isolate ZHAOPu ，LIHai—ynah ，YANGHua-liang ，CHEN Huan-lan YU Kang-zhen 。LU Zhong-hua2 ， (1．AnimalInfluemalabDral0lyoftheMinistryofAgriculture，NationalKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnolqgy，HarbinVeterinaryResearch InstituteofCAAS，Harbin 150001，China；2．CollegeofVeterinaryandAnimalHus ，HeronAgriculturalUniversity．ZheI 450002，hC ina； 3．GeneralSlatlollofNationalAnimalHttdmndiyandVeterinary，Beijing 100026，hC ina) Ah嘣 ：WedesignedapairofprimerstoamplifytheNAgeneofSwineInfluenzaVirus(SIV)A／Swine／InnerMongolia／547／01 (SW／IM／547／01)basedonthereportde genesequence．111ecomplimentaryDNAof