超高效液相色谱-三重串联四极杆质谱分析β-受体激动剂类兽药残留量检测方法.docxVIP

超高效液相色谱-三重串联四极杆质谱分析β-受体激动剂类兽药残留量检测方法李建中，宋 越三重串联四极杆质谱是复杂基质中痕量组分定量分析的重要手段，通过多重反应监控模式（MRM）能够提供高选择性和高灵敏度的检测。建立在亚二微米粒径填料基础上的超高效快速液相色谱（RRLC）已得到广泛的应用，和QQQ联用能够提供高通量和高灵敏度的分离分析。本文运用UHPLC-QQQ对动物源性食品中的14种β-受体激动剂进行定量分析，通过对重复性、线形关系和回收率等方法学参数进行考察，所建立的方法能在8.0分钟内对14种目标化合物完成快速、高灵敏度的检测分析，同时采用同位素内标法进行定量测定。本方法采用Agilent 6460QQQ系统，利用Jet Stream鞘流气技术大大提高了去溶剂效果，同时减少了喷雾造成的离子扩散损失，显著的提高了离子化效率，从而大大提高了灵敏度。本方法采用Agilent特有动态多反应监测（Dynamic MRM）模式对多残留化合物进行监测，实现了自动最大化分配驻留时间(Dwell time)的功能，兼顾了灵敏度及采样点数，实现了有机完美的统一，有效简化了方法的开发。本方法完全满足了国内外对β-受体激动剂类药物日益严格的残留限量监测要求。1实验部分1.1仪器与试剂美国安捷伦公司6460 QQQ质谱仪；美国安捷伦公司1260 UHPLC。1.2液相和质谱条件液相色谱柱为安捷伦Zobax SB-C18（2.1 x 100mm, 1.8 um）；流动相A为水（含0.1%体积比的甲酸+2mM乙酸铵），B为乙腈（含0.1%体积比的甲酸），梯度（B%/min）：2/0，2/0.5，25/4.0，80/5.0，90/5.5，2/5.7，2/8.0；柱温45oC；进样量5μL，流速为0.4 mL/min。QQQ质谱参数（ESI+模式）：干燥气温度（Gas Temp）325oC，干燥气流量（Gas Flow）5mL/min，雾化器压力（Nebulizer）45psi，鞘流气温度（Sheath Gas Temp）400oC，鞘流气流量（Sheath Gas Flow）12mL/min，毛细管电压（Capillary）3500V，MRM参数见表1，安捷伦MassHunter软件用于定性（Qualitative）和定量（Quantitative）分析。2结果与讨论图1为14种β-受体激动剂的MRM叠加谱图。本文对MS和LC条件进行优化，对线形关系（R均大于0.99）、检测限（LOQ均低于0.05ng/mL）、峰面积重复性（RSD6.0%, n=10）等方法学进行了考察（见表2）。所建立的RRLC-QQQ能够对14种β-受体激动剂进行高灵敏度和高通量的定量分析。表1. 14种β-受体激动剂DMRM参数CompoundNameISTDPrecursorIonMS1ResProductIonMS2ResFragmentorCollisionEnergyRet Time(min)Delta Ret TimeSalmeterol416.3Unit398.4Unit130106.0621Salmeterol416.3Unit380.3Unit130176.0621Mapenterol325.3Unit307.2Unit11055.5451Mapenterol325.3Unit237.1Unit110125.5451Mabuterol311.2Unit293.2Unit11075.1221Mabuterol311.2Unit237.1Unit110135.1221Ractopamine-d5√307.3Unit167.2Unit110134.171Fenoterol304.2Unit286.2Unit12083.4571Fenoterol304.2Unit135.3Unit120153.4571Ractopamine302.2Unit284.1Unit11064.1671Ractopamine302.2Unit164.2Unit110124.1671Penbutolol292.2Unit236.2Unit110126.1121Penbutolol292.2Unit201Unit110206.1121Clenbuterol-d9√286.2Unit204.1Unit100134.5911Clenbuterol277.2Unit259.1Unit10054.6071Clenbuterol277.2Unit203.1Unit100124.6071Zilpaterol262.2Unit244.2Unit10072.9681Zilpaterol262.2Unit202.2Unit100172.9681Propranolol260.2Unit183.2Unit120155.5