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实验三双重染色与永久装片的制作重点讲义
实验三 双重染色与永久 装片的制作 授课教师:郑磊 2008.12.10 实验目的 学习并掌握植物制片的双重染色法 掌握徒手切片制成永久装片的方法 实验原理 番红-固绿对染法,是植物制片中最普遍的一种二重染色法,其染色程序简单并能清晰地显示出细胞结构。 番红为碱性染料,能将木质化、角质化、栓质化的细胞壁,以及细胞核中的染色质、染色体和花粉外壁等染成红色; 固绿为酸性染料,能使细胞质及纤维素的细胞壁染成绿色。 实验用具 显微镜、载玻片、盖玻片、单面刀片、双面刀片、培养皿、毛笔、滴瓶、胶头滴管、滤纸 实验材料与试剂 实验材料 吊兰茎、蒜苔 试剂 1%番红水溶液、1%固绿酒精溶液 实验方法 徒手切片 将材料切成薄而透明的切片,镜检以选择较理想的薄片。 染色 将选好的切片置于载玻片中央,加一滴1%番红水溶液,染色15~20min,用滤纸吸去染液,再滴蒸馏水洗去浮色。 脱水 依次滴少许30% 50% 70% 85% 95%各等级酒精各10~15s进行脱水,每滴一滴酒精后用滤纸吸去。 复染 吸去95%酒精后,加一滴1%固绿酒精溶液,复染5~10s,再滴加95%酒精去浮色。 实验方法 透明 吸去95%酒精,滴加无水酒精,然后经1/2无水酒精+1/2二甲苯 二甲苯(两次)每次2~3s,使材料完全透明。透明后保持二甲苯不挥发,盖好盖片,镜检。 制成永久装片 掀开盖片,滴一滴中性树胶,再加盖片封片,然后置于30~35℃恒温箱中烘干。 实验方法 作业 制作一张合格的双重染色切片,要求薄(一层细胞)、平整、透明,染色红绿分明。 简述番红-固绿双重染色的染色原理。 * * LOGO 叶的横切 玉米茎横切 南瓜茎横切 南瓜茎纵切 * * *
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