灵芝对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞MMP.docVIP

　　灵芝对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞MMP 【摘要】 目的 探讨灵芝对在高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）表达基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶-2组织抑制剂(TIMP-2)的影响。方法 大鼠MCs在高糖培养下,予不同质量浓度灵芝、苯那普利刺激后,运用免疫组织化学技术和图像分析法，观察MCs表达MMP-2和TIMP-2的变化, RT-PCR 检测MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平。结果 不同质量浓度的灵芝对高糖培养的大鼠MCs MMP-2和TIMP-2表达的影响不同。与高糖组相比,随着灵芝浓度逐渐增加，MMP-2的表达逐渐增加，TIMP-2的表达逐渐降低。结论 灵芝通过改变高糖培养的大鼠MCs MMP-2和TIMP-2的表达量,影响糖尿病肾病（DN）的进程。 【关键词】 灵芝;基质金属蛋白酶-2; 基质金属蛋白酶-2组织抑制剂;系膜细胞;大鼠；糖尿病肾病 Abstract:Objective To investigate the effect of Ganoderma lucidum on the expressions of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 (TIMP-2) by rat glomerular mesangial cells (MCs) cultured under high-glucose environment.Methods The culture of rat MCs ent. Folloa lucidum of varied concentrations or benazepril, the changes in the expression of MMP-2 and TIMP-2 in the MCs and the mRNA levels of them ined by immunohistochemical method, image analysis and RT-PCR respectively.Results The levels of MMP-2 and TIMP-2 a lucidum, i.e. MMP-2 increased and TIMP-2 decreased a lucidum concentration.Conclusion Ganoderma lucidum may modulate the process of diabetic nephropathy by changing the expression of MMP-2 and TIMP - 2. Key a lucidum; matrix metalloproteinase-2; tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2; mesangial cells; rat; diabetes nephropathy 灵芝作为我国的传统的扶正固本、滋补强壮中药, 用于临床已有悠久的历史。临床和药理研究表明, 灵芝具有多种生理活性和药理作用［1］。有证据表明灵芝(Ganoderma lucidum, GL)能明显降低糖尿病（DM）大鼠的尿微量白蛋白排泄率及形态学异常,并在某种程度上抑制了TGF-β1的表达和合成,.freelesangial cells, MCs）进行干预, 观察MCs表达基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)及基质金属蛋白酶-2组织抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2, TIMP-2)的变化,旨在探讨其治疗糖尿病肾病（DN）可能的作用机制，为扩大该药的临床应用范围提供实验依据。 1 材料和方法 1.1 实验材料 兔抗人MMP-2、TIMP-2多克隆抗体(武汉博士德公司) ; SABC 免疫组化染色试剂盒(武汉博士德公司); 总RNA提取试剂盒、RT-PCR 试剂盒（大连宝生生物工程有限公司）；大鼠MCs由上海长征医院内肾科提供；GL购自保定施达科生物工程技术有限公司,溶于加热的10%的DMEM培养基,配制不同浓度(150、300、600 mg/L)的溶液,无菌过滤待用；苯那普利（benazepril,由瑞士诺华制药有限公司生产）；DMEM培养基为Gibco公司产品；胎牛血清（FBS）为杭州四季青生物工程研究所产品；二甲基亚砜（DMSO）、胰蛋白酶均为Sigma公司产品。 1.2 大鼠MCs的培养和分组 大鼠MCs常规培养于含10% FBS的生理糖（5.0 mmol/