滋阴活血解毒中药对血管内皮细胞损伤的保护作用论文.docVIP

　　滋阴活血解毒中药对血管内皮细胞损伤的保护作用论文 .freelan umbilical vein endothelial cell line ECV-304 ined, and the supernatants ine the contents of tissue plaminogen activator (tPA), plasminogen activator inhibitor (PAI), and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) respectively. Results The viability of the cells in the model group decreased markedly (P 0.01), and the secretion of PAI and ICAM-1 in the model group odel group (P 0.05). The cells PAI and ICAM-1 odel group (P 0.01). Conclusion ZYHXJD have the protective function to the vascular endothelial cells, and this function might be realized by advancing fibrinolysis and inhibiting intercellular adhesion relating matory reaction. Key bus function 2型糖尿病合并脑梗死是糖尿病常见的脑血管并发症,脑梗死是糖尿病致死致残的主要原因。本课题组前期研究证明,滋阴活血解毒中药能有效地治疗糖尿病合并脑梗死1。为了进一步探讨其作用机制,笔者观察了滋阴活血解毒中药对葡萄糖(Glu)、胰岛素(Ins)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的干预作用及其保护机制,现报道如下。 1 实验材料 1.1 细胞株 人脐带静脉内皮细胞株ECV-304, 购自中南大学湘雅医学院细胞中心,复苏后传3～4代,用于正式实验。 1.2 药物 滋阴活血解毒方提取液：熟地黄、黄芪、枸杞子、山茱萸、黄连、丹参、川芎、水蛭、石菖蒲,2剂共268 g,均购自湖南中医药大学附属第一医院门诊药房,水煎浓缩至浓度为每 1 mL药液含原药材1 g。达美康(Gliclazide,法国施维雅药厂及天津华津制药厂合作生产),以DMEM/F12配成终浓度为33 μg/mL的培养液。尼莫地平注射液(德国拜耳公司生产),以DMEM/F12配成终浓度为2 μg/mL的培养液。 1.3 试剂 DMEM/F12培养基(不含葡萄糖,美国GIBCOBRL产品)；胎牛血清(北京鼎国生物技术发展中心产品)；胰蛋白酶(美国GIBCOL公司分装；消化活力1∶250)；二甲基亚砜(DMSO,美国Sigma公司产品)；噻唑蓝(MTT,美国Sigma公司产品)；DNA marker(北京鼎国生物技术有限公司产品)；RNase(美国Genviea公司产品)；Ins(丹麦诺和诺德公司产品)。细胞粘附分子(ICAM-1)试剂盒由晶美生物工程有限公司提供。组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)试剂盒由上海太阳生物技术公司提供。 1.4 主要仪器 超净工作台、细胞培养箱、倒置显微镜、双目生物显微镜、酶标仪、电子天平、微量移液枪、细胞培养板、微孔滤器。 2 实验方法 2.1 试剂的配制 制备本实验中的ox-LDL时所用的Cu2+浓度为15 μmol/L, 37 ℃、5%CO2孵箱中孵育24 h,并以5倍于Cu2+浓度的乙二胺四乙酸钠盐(EDTA)终止氧化。然后以20倍体积的10 mmol/L PBS(pH 7.4)透析48 h以上,每8 h换透析液1次,以去除Cu2+和可溶性的过氧化产物。以PBS分别将氧化完全的ox-LDL配成终浓度为100 mg/L和200 mg/L。Glu用PBS配成终浓度分别为20 mmol/L和40 mmol/L的溶液。过滤除菌,分装后4 ℃冰箱内保存备用；胰蛋白酶,用无钙镁离子的D-Hanks液配成0.25%(或配成1%母液,用时稀释成0.25%溶液),0.22 μm微孔滤膜过滤除菌,分装,-20 ℃冰箱冻存,用时室温冻融,水浴恒温箱中预热至37 ℃。 2.2 细胞处理与分组 ECV-304细胞复苏后,以0.25%胰酶-0.02% EDTA联合消化液消化贴壁细胞,至细胞回缩变圆形,立即弃去消化液,并加入完全培养基(含10%胎牛血清),轻轻吹打内皮细胞,并以PBS洗涤后离心去除EDTA,传代至培