zzj-4-蛋白质1.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 甲醛滴定法 在一般情况下，a-NH+3在pH12-13时才能解离完全，一般的指示剂则难以指示。加入过量甲醛，滴定过程中降低了氨基的碱性。使滴定曲线向低pH转移。 * p135 1).a-NH2参与的反应 (1).与亚硝酸反应 (2).与甲醛反应 (3).酰化反应 (4).烷化反应 (5).希夫反应 2).a-COOH参与的反应 (1).成盐反应 (2).成酯反应 (3).酰卤化反应 (4).脱羧反应 (5).叠氮反应 3).由a-氨基与羧基共同参与的反应 (1).茚三酮的颜色反应 (2).成肽反应 4).氨基酸的侧链基团的反应 2. 氨基酸的化学反应 * p135 1). 由a-NH2参与的反应 (1).与亚硝酸反应 氨基酸（伯胺）与亚硝酸反应，生成羟酸，并放出N2 一分子游离氨基形成一分子氮气，因此可以用来定氮，这是Van slyke定氮法的原理，利用这种定氮法，可以检测蛋白质的水解程度。 修饰蛋白质中的氨基,以研究这一基团在结构与功能关系上的作用。 * p135 （2）与甲醛的反应 氨基与甲醛反应生成羟甲基衍生物，使氨基的碱性降低，然后用NaOH滴定，从消耗的碱量可以计算出氨基酸的含量。 （3）酰化反应 α-氨基与酰氯或酸酐在弱碱溶液中发生作用时，氨基即被酰基化。 酰氯 酸酐 * p136 a-氨基中的氮是一个亲核中心，能发生亲核取代反应。 * 叔丁氧甲酰氯 对甲苯磺酰氯 丹磺酰氯(DNS) 邻苯二甲酸酐 酰化试剂在多肽和蛋白质的人工合成中被用作氨基的保护试剂 多肽链N末端氨基酸的标记 * 丹磺酰-aa (DNS-aa) 是荧光物质，在紫外光激发后发黄色荧光。 多肽的末端 * （4）烃基化反应（烷化反应） α-氨基的一个H键可被烃基（包括环烃及其衍生物）取代 DNP-氨基酸（黄色） 2，4-二硝基氟苯（DNFB） Sanger试剂 * p136 苯异硫氰酸酯，PITC 苯氨基硫甲酰衍生物（PTC-氨基酸） ? 苯乙内酰硫脲衍生物（PTH-氨基酸），无色，可以用层析法分离鉴定。 被Edman用来鉴定多肽的NH2末端氨基酸（测序） Edman反应 PITC PTC-氨基酸 PTH-氨基酸 * 与丹磺酰氯（DNS-Cl）的反应：生成荧光物质DNS-氨基酸。 与2,4-二硝基氟苯（2,4-DNFB）的反应（Sanger反应）： 生成黄色的二硝基苯-氨基酸衍生物。 与苯异硫氰酸酯（PITC）反应（Edman反应）：生成苯乙 内酰硫脲-氨基酸。 以上三个反应用于蛋白质的N-末端的测定。 氨基酸的a-氨基 * 氨基酸的a-氨基能与某些醛类反应生成弱碱，这个弱碱叫西佛碱（Schiff’s base). （5）形成西佛碱（Schiff）反应 西佛碱是某些酶促反应的中间产物。 * p137 与碱成盐，可与醇成酯。 2). 由a-COOH参与的反应 a-氨基酸的a-COOH具有一般羧酸的羧基的性质。 (1).成盐、成酯反应 干燥，HCl 回流 成盐、成酯后羧基的化学反应性能被保护或基活，而氨基的化学反应性能得到加强或说氨基被活化，易与酰基或烃基结合。 * p138 (2).成酰氯反应 氨基酰化的氨基酸，可以在低温下与PCl5或PCl3起反应，形成酰氯，从而使它的羧基被活化。 (3).脱羧基反应 脱羧酶 一级胺 * p138 弱酸 加热 3).由a-NH2与COOH共同参与的反应 * p138 (2).成肽反应 肽键 * p139 4). 氨基酸的侧链基团的反应 R基名称 化学反应 用途及 重要性 苯环 黄色反应：与硝酸作用产生黄色物质。 定性分析Phe, Tyr. 酚基 Millon反应：与HNO3,Hg(NO3)2和HNO3反应成红色。 Folin反应：酚基可还原磷钼酸，磷钨酸成兰色物质。 定性分析Tyr 吲哚基 乙醛酸反应：与乙醛酸或二甲基氨甲醛反应，产生紫红色化合物。 还原磷钼酸，磷钨酸成钼蓝，钨蓝 鉴定Trp * p140 续 表 胍基 坂口反应：在碱性溶液中胍基与含有a-萘酚及次氯酸钠的物质反应 成红色物质。 鉴定Arg 咪唑基 Pauly反应：与重氮盐化合物结合生成棕红色物质。 测定His, Tyr 巯基 亚硝基亚铁氰酸钠反应：在稀氨溶液中与亚硝基亚铁氰酸钠反应成红色。 Cys的测定 羟基 与乙酸或磷酸作用成酯。