第二章微生物的纯培养和显微技术.pptVIP

第二章微生物的纯培养及显微技术 §1 微生物的纯培养 一、无菌技术 一、无菌技术 分离——把自然界中以混杂状态生长在一起的各类微生物单个分开。 筛选——根据菌种的形态特征和生理特征的不同结合生产实际的要求，灵活地、有的放矢地设计出各种优选方法以便快速而准确地挑选出所需要的菌种。 1、微生物培养的常用器具及其灭菌：试管、三角瓶、培养皿等。 2、接种操作 二、用固体培养基分离纯培养 菌落：在固体培养基上形成的子细胞群体。 纯培养：由一个细胞繁殖而成的群体，又称克隆。 菌苔：指菌体在固体培养基表面密集生长时，多个菌落融合在一起联成一片称菌苔。 分离方法 1、平板划线分离法。 2、三角玻璃刮棒连续涂布法 3、稀释分离法 常见的有十倍稀释法：每稀释一次菌细胞的浓度下降十倍。 4、稀释摇管法。 平板划线分离图 三角玻璃刮棒连续涂布图 十倍稀释图 厌氧微生物分离方法 ①物理方法 A．抽气法——将培养物置真空干燥器中抽真空，再培养。 B．充气法——把培养物放一密闭贮器中充入N2（排尽空气） 六、二元培养物 纯培养物：只有一种微生物的培养物。 混合培养物：含有两种以上微生物的培养物。 二元培养物：只含两种微生物且有意识地保持二者之间特定关系的培养物。 七、微生物的保藏技术 原理：挑选优良菌种，人工创造低温、干燥、缺氧的环境条件，使微生物菌种的代谢活动处于最不活跃的休眠状态以达保持纯种的目的。 菌种保藏方法 1、传代培养保藏 原理：缺氧或者说低温 优：方法简单，成活率高 缺：保存时间短，传代次数多，容易污染，易变异导致菌种退化，适于生产和科研中经常采用的菌种。 菌种保藏方法 2、冷冻保藏 原理：使微生物处于冷冻状态而代谢作用停止。 3、干燥保藏法 沙土管保存方法：取河砂若干，24目过筛?10%HCl浸泡24小时?水洗至中性?烘干后分装安瓿瓶或试管，加棉塞?1kg/cm2、30分钟灭菌?无菌检查?每管加孢子悬液，接种环拌匀?干燥器中干燥?火焰熔封或蜡封?干燥器中保藏。 菌种保藏方法 4、冷冻真空干燥保藏：是将菌种用保护剂制成菌悬液，先在极低温度下快速冷冻，再在极低的温度下抽真空干燥，使其中的水分直接升华为水蒸汽，以达干燥的目的。 原理：低温、干燥、真空（缺氧） §3 显微镜下的微生物 原核微生物——指细胞核无核膜、无核仁，没有染色体，不进行有丝分裂的微生物。 真核微生物——指具有完整的细胞核、有核仁、核膜、染色体，能进行有丝分裂的微生物。 一、细菌和古生菌 定义：细菌是一类细胞细而短（细胞直径约0.5um，长度约0.5~5um）、结构简单、细胞壁坚韧、以二等分裂方式繁殖和水生性较强的原核微生物。 生存环境：温暖潮湿、富含有机物的地方，都有大量细菌活动。有特殊的臭味或酸败味，发粘、发滑。 1、细菌的形态和排列 细菌的形态 （1）球菌 形状：球形（独存）或近似球形（几个连在一起，稍扁） 大小：?0.5～1μm 分裂与排列： 杆菌端部形状 半圆形 钝圆形 平行 线形 二、真菌 真菌包括的种类极其繁多，且形态、大小各具千秋，既有形体微小的单细胞酵母，也有个体较大、结构复杂的多细胞例如磨菇等，真菌中酵母和霉菌研究较为详细。 （2）重要的代表霉菌 与人类的关系非常密切。日常生活中衣物、食品的发霉现象、酿酒（根）、制酱（曲）、 做腐孔（毛霉）、生产抗生素等。霉菌是人们在实践活动中认识最早并加以利用的一类微生物。 根霉 结构特点：菌丝无隔膜的单细胞，在培养基上生长时，由营养菌先生出葡萄枝，再由葡萄菌丝生出特有的分枝状假根，在假根看生处相对长出直立的孢子囊梗，梗的顶端膨大形成孢子囊，内生孢子，有半球形的囊轴，有囊托。 用途：酿酒 小曲饼中有 生产葡萄糖 淀粉（100%）→葡萄糖 毛霉 结构特点：菌丝无隔膜的单细胞，无假根，无葡萄枝，由菌丝体直接长出孢子囊梗，顶端膨大形成孢子囊，内生孢子。囊轴与囊梗相连处无囊托（不分隔） 用途：具蛋白酶 、有较强的分解大豆的能力，用作制腐乳，豆豉；产淀粉酶 、活力强，能将淀粉转化为糖，作糖化菌。 曲霉 结构特点：菌丝有隔膜的多细胞，某些菌丝细胞特化膨大形成足细胞。由足细胞处生出分生孢子梗（无隔膜），顶部膨大成顶囊，顶囊表面以辐射状着生一到二层小梗，小梗顶端着生成串的分生孢子，分生孢子呈红、 绿、 棕、 黑等各色，常使菌落呈各种色彩，为鉴定依据。 主要种类： 黑曲霉 重要的糖化菌 、柠檬酸、 葡萄糖酸生产菌。 黄曲霉 可用来生产淀粉酶 、某些菌能产黄曲霉毒素是一种超剧毒致癌物，易在花生、 玉米上形成。 米曲霉 可用作生产淀粉酶 青 霉 结构特点： 菌丝为有隔膜的多细胞，无足细胞、假根及葡萄枝。由菌丝生出分生孢子梗（有隔膜）顶端不膨大形成顶囊，而是经多次分枝形成扫帚状分枝，顶端 产