毒理学实验.docVIP

实习一 实验动物的一般操作技术 一、目的和意义 毒理学研究需要用实验动物来进行各种实验，通过对动物的实验观察和分析来研究毒作用，获得毒物的毒性、剂量-反应关系、毒作用机制等方面的资料，因此动物实验是毒理学研究中重要的手段之一。 通过本次实习学习毒理学实验中有关动物实验的基本操作技术，掌握实验动物的选择、动物抓取、染毒方法和生物材料的采集等技术。 二、内容 （一）健康动物的选择 无论选择哪种种属品系的动物进行实验，均要求选择健康的实验动物。健康动物检查时要求达到：外观体型丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，眼睛明亮，行动迅速，反应灵活，食欲及营养状况良好。选择时重点检查以下项目： 1.眼睛 明亮，瞳孔双侧等圆，无分泌物。 2.耳 耳道无分泌物溢出，耳壳无脓疮。 3.鼻 无喷嚏，无浆性粘液分泌物。 4.皮肤 无创伤、无脓疮、疥癣、湿疹。 5.颈部 要求颈项端正，如有歪斜提示可能存在内耳疾患，不应选作实验动物。 6.消化道 无呕吐、腹泻，粪便成形，肛门附近被毛洁净。 7.神经系统 无震颤、麻痹。若动物（大鼠、小鼠）出现圆圈动作或体位倒置呈圆圈摆动，应该放弃动物。 8.四肢及尾 四肢、趾及尾无红肿及溃疡。 （二）实验动物的性别鉴定 动物性别不同对毒物的敏感性也不同，这可能与性激素、肝微粒体羟基化反应有关，也随受试物而异。因此，要根据实验要求选择性别，一般实验如对性别无特殊要求者，宜选用雌雄动物各半。 1.大鼠、小鼠 主要依肛门与生殖孔间的距离区分，间距大者为雄性，小者为雌性。成年雄鼠卧位可见到睾丸，雌性在腹部可见乳头。 2.豚鼠 用在一只手抓住豚鼠颈部，另一只手把开靠近生殖器孔的皮肤，雄性动物在圆孔中露出性器官的突起，雌性动物则显出三角形间隙，成年雌性豚鼠胸部有两个乳头。 3.家兔 将家兔头轻轻夹在实验者左腋窝下，左手按住腰背部，右手拉开尾巴并将尾巴夹在中指和无名指中间，然后用拇指和食指稍稍把生殖器附近的皮肤扒开。雄兔即可见一圆孔中露出圆锥形稍向下弯曲的阴茎（但幼年雄兔看不到明显的阴茎，只能看到圆孔中有凸起物，即是阴茎）。雌兔此处则为一条朝向尾巴的长缝，呈椭圆形的间隙，间隙越向下越窄，此即为阴道开口处。 （三）实验动物的抓取方法 正确地抓取固定动物，是为了在不损害动物健康、不影响观察指标、并防止被动物咬伤的前提下，确保实验顺利进行。 1.小鼠的抓取方法 先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台上向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。 2.大鼠的抓取方法 大鼠的抓取基本同小鼠，只是大鼠比小鼠性情凶猛，不易用袭击方法抓取。为避免咬伤，可戴上帆布或棉纱手套。采用左手固定法，用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指紧捏鼠背皮肤，置于左掌心中，这样右手可进行各种实验操作。 3.豚鼠的抓取方法 豚鼠胆小易惊，在抓取时要稳、准、迅速。用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，另一只手托住臀部即可。 4.兔的抓取方法 用右手抓住兔颈部的毛皮提起，然后左手托起臀部或腹部，让其体重的大部分重量集中在左手上。注意不要抓取双耳或抓提腹部。 （四）实验动物的编号、标记方法 1.称重 大、小鼠秤的感应量需在0.1g以下。根据实验的不同要求，选择一定数量的大、小鼠，体重要求在同一组内、同性别动物体重差异应下于平均体重的10%，不同组间同性别动物体重均值差异应小于5%。 2.编号 （1）染色法：以苦味酸来标记。左前腿为1，左腰部为2，左后腿为3，头部为4，背部为5，尾基部为6，右前腿为7，右腰部为8，右后腿为9。如果动物编号超过10，再涂染另一种涂料，表示相应的十位数，即左前腿上为10，左腰部为20，以此类推。 （2）剪耳法：在耳朵不同部位剪一小孔代表某个号码。常以右耳代表个位，左耳代表十位。 （3）烙印法：用刺数钳在动物耳上刺上号码，然后用棉签蘸着溶在酒精中的黑墨在刺号上加以涂抹，烙印前最好对烙印部位预先用酒精消毒。 （4）号牌法：用金属的牌号固定于实验动物的耳上，大动物可系于颈上。 （五）实验动物的随机分组方法 为了得到客观的剂量-反应关系，应将一群动物按统计学原则随即分配到各个试验组中。可按随机数字表方法进行随机分组。具体做法举例说明： 设将30只雄性动物平均分成A、B、C、D、E、F六组，每组5只动物。将已编号的动物以号码按随机数字表进行分配。如选随机数字表第二行，从第一个数字开始，顺次抄下30个数字（可依横行、竖行或斜行抄录）。将每个数字一律除以6（组数），根据余数1、2、3、4、5、0（整除者）分别将动物分配到A、B、C、D、E、F组，结果见表1（数字源自第二行随机数字表） 表1 动物随机分组表 动物号 1 2 3 4 5 6